有康间充质干细胞无血清培养基(干细胞 间充质干细胞)
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动物细胞培养的常用培养基类型有哪些?各有何特点和用途
动物细胞的培养基的种类和组成 分3类: ⒈天然培养基 ⒉合成培养基 ⒊无血清培养基
天然培养基:
天然培养基主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优点是营养成分丰富,培养效果良好,缺点是成分复杂,来源受限。天然培养基/液的种类很多,包括生物性液体(如血清);组织浸液(如胚胎浸液);凝固剂(如血浆)等。如:胎牛血清
合成培养基:
合成培养基(synthetic medium),又称为组合培养基,是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的,其所含的成分(包括微量元素在内)以及他们的量都是确切可知的。合成培养基一般用于实验室中进行的营养、代谢、遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究。比如:1640、DMEM
无血清培养基:
无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊椎动物细胞以制备单克隆抗体,病毒抗原和重组蛋白等。大多数的无血清培养基含有向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素,以及一些蛋白质和清蛋白,纤维蛋白,胎球蛋白等,这些蛋白在细胞培养中发挥各种不同的功能,如提供细胞贴壁所需的基质,抗生物反应器剪切力,作为脂质和其他生长分化因子的载体等。比如:间充质干细胞无血清培养基
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无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。无血清培养基的基本配方为基础培养基及添加组分两大部分。 无血清培养基可避免血清批次间的差异影响,提高细胞培养和实验结果的重复性,减少血清对细胞的毒性作用和血清源性污染,减少了血清中蛋白对某些生物测定的干扰,便于对实验结果的分析。基于无血清培养基以上的优势,ScienCell实验室根据不同细胞的生长特性研发了不同种类的无血清培养基。ScienCell无血清培养基列表如下:
1111 SMCM-sf 平滑肌细胞培养基
1511 NPrCM 神经前体细胞培养基
1521 NM 神经细胞培养基
1601 OPCM 少突胶质前体细胞培养基
1611 OsM 球状少突细胞培养基
2101 KM 角质细胞培养基
2111 KM-d 角质细胞培养基(确定)
2311 FM-sf 成纤维细胞培养基
2561 TEpiCM 扁桃体上皮细胞培养基
2611 OKM 口腔角质细胞培养基
2951 CoEpiCM 结肠上皮细胞培养基
3211 BEpiCM 支气管上皮细胞培养基
3231 SAEpiCM 小气管上皮细胞培养基
4121 EpiCM-2 上皮细胞培养基-2
4321 UCM 尿道上皮细胞培养基
4411 PEpiCM 前列腺上皮细胞培养基
5501 HemGM 造血细胞培养基
5801 STEMium 人胚胎干细胞无血清培养基
5811 STEMium-XF 无异种人胚胎干细胞生长培养基
5881 MEF-cm 小鼠胚胎成纤维细胞培养基
5891 bFGF-std MEF-cm 碱性成纤维细胞生长因子刺激的小鼠胚胎成纤维细胞条件培养基
5911 CSM 心肌细胞选择性培养基
5931 PSCNIM 多功能干细胞神经诱导培养基
6511 CEpiCM 角膜上皮细胞培养基
7311 OEpiCM 卵巢上皮细胞培养基
7511 MSCM-sf 间充质干细胞培养基
7611 MEpiCM 乳腺上皮细胞培养基
细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程,一般要逐步降低血清浓度,直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化,是否有部分细胞死亡,存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。
ScienCell无血清培养基,是经灭菌的液体培养基,包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质。每套包含500毫升基础液,5毫升细胞生长添加物,5毫升双抗,混匀后即为完全培养基。每一款专用培养基均搭配特定类型的细胞生长添加物成分,为细胞的传代和生长提供最佳环境。
为什么干细胞可以在无血清培养基中生存
动物细胞培养液:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清或血浆.
植物组织培养液的成分:水、无机盐、蔗糖、植物激素(生长素,细胞分裂素)等.
干细胞对培养条件要求较高,常用的胚胎肝细胞培养基有mTeSR 1培养基,主要成分有:DMEM、bFGF,EGF、血清、双抗、LIF、谷氨酰胺、二巯基乙醇、非必需氨基酸等。
干细胞相关的培养液都必须在5%CO2的气体环境中培养使用。否则会对细胞产生影响。气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环,产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。二氧化碳既是细胞代谢产物也是细胞生长繁殖所需成分,它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4,偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。一般情况下,细胞耐酸性比耐碱性大一些,在偏酸环境中更利于细胞生长。
无血清培养基的无血清培养基一些配方
1.神经细胞,干细胞,PC12细胞
成份 终浓度
葡萄糖--0.6%
谷氨酰胺-2mM
NaHCO3--3mM
Hepes --5mM
胰岛素--2.5μg/ml
转铁蛋白 -100ng/ml
孕 酮 --20nM
丁二胺--60μM
硒酸钠--30nM
青霉素--50mg/ml
链霉素--50mg/ml
最后用DF12添加到100ml即可
2.各类小鼠胚胎癌细胞系培养基
DMEM/F12 1:1混合成1000ml
NaHCO32.4g
HEPES(1.5M) 10.0ul
硒酸(5*10-6M) 10.0ug
纤粘连蛋白 1ug/cm(37度作用15-30分钟)
胰岛素 1000.0ug
转铁蛋白 5000.0ug
3.NIH3T3小鼠成纤维细胞培养基
DMEM/F12 1:1混合成1000ml
HEPES 15mM
大豆胰酶抑制剂 0.1%
胰岛素 10.0ug/ml
转铁蛋白 25.0ug/ml
纤粘连蛋白 5.0ug/ml
4.杂交瘤细胞培养基
DMEM/F12 1:1混合成1000ml
NaHCO31.2g/L
HEPES 15mM
胰岛素 5.0ug/ml
氨基乙醇 20.0uM
硒酸 2.5mM
转铁蛋白 35.5ug/ml
应用:无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊动物细胞以制备单克隆抗体,病毒抗原和重组蛋白等。大多数的无血清产品含有向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素,以及一些蛋白质如清蛋白,纤连蛋白,胎球蛋白等,这些蛋白在细胞培养中发挥各种不同功能,如吸附毒性化合物,抗生物反应器剪切力,提供细胞贴壁所需的基质,作为脂类和其他生长因子的载体等。
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