胚胎干细胞专用胎牛血清（胎牛血清存放条件）

在本次分享中，我们将会谈论胚胎干细胞专用胎牛血清的相关知识，并且还会解释胚胎干细胞专用胎牛血清。

胎牛血清的主要成分有哪些？

据统计，用于细胞体外培养的胎牛血清中含有至少400多种成分，其中大部分为活性成分，这些活性成分的浓度随批次不同而有一定差异。那么，其中到底有哪些成分呢？那么小编给你列举一二。

一、胎球蛋白

胎球蛋白有一些重要的生理作用。

1）它作为生长因子的载体蛋白。它和白蛋白（又称为清蛋白）一样，都有载体蛋白的功能，例如携带钙离子。在胎牛血清中，胎球蛋比白蛋白的含量还要高。

2）抑制胰蛋白酶。

3）参与骨的形成和重构。

4）促进细胞附着、生长和分化。

5）增强巨噬细胞的吞噬作用。

6）在调控胰岛素敏感性、餐后血糖处置等均发挥重要作用。胎球蛋白敲除的小鼠胰岛素敏感性显著增强。

二、脂联素

有人发现，将牛脂联素注射入C57小鼠，可降低循环血糖水平和在高脂饮食后提高脂肪清除率。持续注射牛脂联素两周后，胰岛素敏感性和葡萄糖耐受性显著增强，高脂喂养小鼠肝脏脂质堆积减少。这些结果提供了直接的证据表明内源性牛脂联素是一种调节脂肪和葡萄糖代谢的生理激素。

以上可以看到，胎牛血清提供的一些活性因子参与营养的运输、促进营养分子向细胞的转运和利用，调节细胞的代谢和生理状态。可见胎牛血清在细胞环境中发挥着积极的作用，这是人工合成的基础培养基所比拟不了的。

胎牛血清在市面上的品牌很多，例如有Ausbian胎牛血清，Gibco胎牛血清等，血清的品质和价格都很重要，大家可以选择使用。

细胞培养中常用的血清有哪些，有什么区别

细胞培养中血清的类别：

胎牛血清、透析型胎牛血清 、天然低IGG胎牛血清 、干细胞培养胎牛血清 、特殊用途胎牛血清 、活性炭/葡萄糖处理胎牛血清 、胎牛血清替代物 、小牛血清 、新生牛血清 、加强型小牛血清 、补铁小牛血清 、成牛血清 、供体马血清 、兔血清 、鸡血清 、猪血清 、马血清 、其他动物血清 、合成血清替代品。在细胞培养中最常用的是胎牛血清，胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

细胞培养中血清的作用

提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物.

2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力.

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用.

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源.

5.起酸碱度缓冲液作用.

6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害.

获得胚胎干细胞的方法

小鼠ES细胞

小鼠ES细胞的分离方法基本成熟，且已广泛应用于生命科学研究的各个领域。1981年Evans首次分离得到小鼠ES细胞，他以手术切除受精后2.5 d小鼠卵巢并结合激素注射干扰子宫环境，从而使胚胎延迟着床，再回收胚胎，将其体外培养于STO细胞饲养层上，结果得到了小鼠ES细胞系。Martin G R以免疫外科法剥离小鼠囊胚滋养层细胞，得到内细胞团(ICM)并将其置于STO细胞饲养层上，培养基为小鼠PSA-1 ES细胞条件培养基，结果也得到小鼠ES细胞。此后，Axelord等用微滴法得到小鼠ES细胞系；Kaufman等用单倍体延迟着床小鼠囊胚建立同源二倍体ES细胞系；Wobus等首次用原代小鼠成纤维细胞作饲养层建立了小鼠ES细胞系；Smith等首次使用大鼠肝细胞条件培养基作为分化抑制物建立了小鼠ES细胞系。Brook F A等进一步完善了小鼠ES细胞的分离方法，以致从许多品系小鼠包括近交系和突变系，都可获得ES细胞。 体细胞核移植

分离小鼠ES细胞并非只能从囊胚，也并非必须依赖饲养层细胞。Dhhaise等将52枚8-细胞小鼠胚胎消化成单个分裂球并培养于小鼠原代成纤维细胞饲养层上，所用培养基为DMEM/F12，并添加100 mL/L的胎牛血清、100 mL/L的新生犊牛血清和0.1 mmol/L的2-巯基乙醇，5天后，出现多个干细胞集落，消化传代后建立了一个ES细胞系MSB1。将MSB1注入SCID(severe combined immunodeficient mice)小鼠，能产生包含三胚层分化物的畸胎瘤，注入52枚囊胚产生了2个活的个体(1雄，1雌)，但雄性个体无生殖能力。Tojo等用同样方法从杂交小鼠(C57BL/6×DBA/2)8-细胞胚也得到了ES细胞。小鼠ES细胞具有无限增殖的自我更新能力。Suda Y等将小鼠ES细胞传250代以上没有出现转化的迹象，它们仍具有正常的二倍体核型；在生殖系嵌合体中能产生正常的配子；作为核供体能重组克隆胚胎。上述结果表明小鼠ES细胞是永生性的。

大鼠ES细胞

Iannaccone P M等从大鼠PVG近交系分离克隆大鼠ES细胞系-RESC-01，该细胞系对SSEA-1和AKP呈阳性，在大鼠胎儿成纤维细胞饲养层上能很好的增殖，在体内环境能分化形成多种细胞类型。RESC-01细胞系在体外悬浮培养时形成的胚体出现有节律的收缩运动，将其注入囊胚并移植假孕母鼠能生成嵌合体。Kawase等也利用大鼠胎儿成纤维细胞做饲养层，从DA大鼠品系分离建立了RES-DA1ES细胞系，它与小鼠ES细胞形态相似，表达AKP和4C9抗原。Brenin等也用不同的方法分离得到了ES细胞。Sun等以大鼠ES细胞为核供体，得到了核移植后代。Vassilieva等发现大鼠ES细胞表达SSEA-1、Oct-4和IL-6等细胞标记。

猪ES细胞

Piedrahita J A等采用STO、猪成纤维细胞和猪子宫上皮细胞作为饲养层，以DMEM为基础培养液，从猪囊胚ICM分离ES细胞，发现猪囊胚ICM在STO或PMEF饲养层上可以附着增殖，而在猪胎儿成纤维细胞饲养层上虽可附着但增殖甚微，传不过4代即发生死亡。Evans等将6天～7天猪囊胚直接培养于STO饲养层上，挑出ICM细胞经增殖传代培养建立了猪ES细胞系。Strojek R M等认为分离猪ES细胞的最适胚胎为第10天囊胚。研究表明，6日龄～7日龄胚胎在培养过程中极易发生死亡，IC

胚胎干细胞研究(16张)M克隆获得率极低，而第10天的胚胎容易培养，ICM克隆获得率较高，但细胞易于分化。Vasil’ev I M等研究了胚胎发育阶段、培养基种类、饲养层细胞等影响猪ES细胞分离的因素，结果表明不同发育阶段的附植前囊胚是影响猪ES细胞分离的限制性因素。Wheeler M B等报道猪ES细胞能形成正常的嵌合体和包含三胚层分化物的囊状胚体，在维甲酸和DMSO的作用下，猪ES细胞能分化形成上皮细胞、肌肉细胞、脂肪细胞、成纤维细胞等，Miyoshi等从体外授精囊胚分离得到猪ES细胞，并以类ES细胞为核供体，获得了核移植囊胚。国内关于猪ES细胞分离克隆的研究相对较少，李松等分离得到猪ES细胞并传至第2代，在此基础上，徐军等将猪ES细胞传至3代，冯秀亮等将猪ES细胞传至5代，冯书堂等也分离得到猪ES细胞，同时对所分离的细胞进行了初步检测和鉴定，证明其具有多能性。

牛ES细胞

Saito等在加有LIF的培养基中对牛ICM进行培养，分离得到牛ES细胞并进行传代。Sims等使用与一般ES细胞分离完全不同的低密度培养法，使用BRL(buffalo rat liver)条件培养基并添加亚硒酸钠、胰岛素、运铁蛋白和50 mL/L胎牛血清，培养6 d～10 d，得到15个ES细胞系，将其作为核供体进行核移植得到659枚重构胚，卵裂率70%，囊胚率24%，将其中34枚胚胎移植27头假孕母体，13头妊娠，最后生出4头犊牛。而Stice S L等报道，以牛ES细胞为核供体建立的重组胚在移植受体后虽然会出现妊娠现象，但妊娠时间不超过60天，主要是因为胎盘畸形发育，包括缺乏子叶以及子宫阜出血反应。若将重组胚与正常8-细胞胚嵌合，则该嵌合胚可发育至85天，胎儿同样缺乏子叶，DNA分析证实50%的嵌合体胎儿组织来源于ES细胞。Ito等分析比较了牛体内和体外培养的桑椹胚分裂球和囊胚ICM分离ES细胞的效果，结果仅在囊胚组获得了类ES细胞。Cibelli等由49枚7日龄牛胚胎ICM分离到27个ES细胞系，用注射法将β-半乳糖苷酶基因导入ES细胞，选择转染的ES细胞注入8-细胞～16-细胞牛胚，其中18枚胚胎移植7头受体，妊娠5周后，得到12个胎儿。对胎儿进行检测，6个胎儿分别在生殖腺或原始生殖细胞(PGCs)中检测到标记基因，表明ES细胞参与生殖系嵌合。Cibelli等建立应用牛胎儿成纤维细胞核移植生产转基因牛类ES细胞的方法，得到6头嵌合体。Mitalipova等自致密桑椹胚分离牛ES细胞，最高一株ES细胞传至150代，且表达SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4和c-kit受体。

羊ES细胞

Handyside等以绵羊皮肤成纤维细胞和胎儿成纤维细胞作饲养层，从7日龄～8日龄绵羊囊胚分离类ES细胞，结果得到内胚层样细胞而无ES细胞出现。Tsuchiya用免疫外科法分离8 d～9 d绵羊囊胚ICM，培养于STO细胞饲养层上，得到2个类ES细胞系，传至4代。Tillmann等用胎牛肝成纤维细胞作饲养层分离得到传至20代的绵羊类ES细胞和40代的山羊类ES细胞。Modinski等将绵羊ES细胞与囊胚嵌合得到2只嵌合体绵羊。Campbell等用第1代～第3代的类ES细胞作核供体进行核移植，得到了4只绵羊。

兔ES细胞

Graves K H等从兔子附植前囊胚分离得到ES细胞，并进行了初步鉴定，证明它们具有在饲养层上保持未分化状态的增殖能力，体外传代培养1年以上，仍具有正常的核型，且能形成包含三胚层分化物的胚体。之后，Niemann等以PMEF为饲养层，建立了9个兔ES细胞系。Schoonjans L等将兔ES细胞注入囊胚获得了包括生殖系在内的嵌合体兔子。陈颖等以PMEF为饲养层培养兔分割囊胚，结果得到传至7代的兔ES细胞，将第2代的兔ES细胞与囊胚进行嵌合，得到1只皮毛嵌合体仔兔，但未证实ES细胞是否参与了生殖系嵌合。

哪种牛的血清做实验室用的?

一、特级类胎牛血清（最高级别的，专用于干细胞的胎牛血清）

1、Hyclone 北美特级胎牛血清（SH30070.03）

目前，性能最好的血清，实验室反馈不错的，那就是Hyclone SH30070.03的特级胎牛血清， Hyclone的“头牌”。

这款血清--Hyclone特级胎牛血清（Defined FBS），货号：SH30070，是世界上唯一经过40纳米过滤的顶级胎牛血清，极佳的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量小于10EU/ml，血红蛋白含量小于10mg/dl。此血清可以广泛用于各种细胞培养，包含任何干细胞系的培养。

2、Gibco北美特级胎牛血清（16000-044）

invitrogen公司在美国原装生产的特级胎牛血清，货号：16000-044，是100nm过滤3次，内毒素和血红蛋白含量都可以与Hyclone的SH30070.03相媲美。也可以用于培养大部分的干细胞系。

二、优等类胎牛血清

1、Hyclone加拿大优等胎牛血清（SH30396）

性价比最高的是Hyclone加拿大优等胎牛血清（Characterizend FBS），货号：SH30396，血清采自加拿大，由Hyclone公司总部的员工采集加工，采集方法，加工过程，检定标准与美国原产优等胎牛血清完全一致，市场价格低于美国原产的。经过3次100nm过滤，内毒素含量小于25EU/ml，血红蛋白含量小于25mg/dl。此血清，在2005年以前，是很多实验室选择血清的首选，价格适中，质量过硬，应用细胞非常广泛。

2、Hyclone澳大利亚优等胎牛血清（SH30084）

基本与加拿大的优等血清是一样的，级别也非常相似，各种级别都有。

3、Gibco澳大利亚胎牛血清（10099-141）与Hyclone澳大利亚胎牛血清差不多，市场价也是3200元/500ml左右。这一级别的血清，也能用于干细胞培养，可是，不象特级胎牛血清那么优秀。

三、普通进口胎牛血清 Hyclone南美胎牛血清（SV30087）

目前市场上用的最多的Hyclone血清是南美胎牛血清（FBS） SV30087 ，此血清采自南美，在国内（兰州）过滤并测试检验，经三次100纳米过滤，根据中国商标法的规定标贴中文标签，内毒素含量小于等于10EU/ml,血红蛋白含量小于等于20mg/d。

四、国产的各种系列胎牛血清

国产的胎牛血清，国内没有严格意义的胎牛血清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而国内都是剖腹产出胎牛，8小时左右取血，然后，进行过滤分装。所以，国产的胎牛血清不是严格意义的胎牛血清。不过也很多实验室使用，具体情况那就看实验的要求了。

五、其他血清

新生牛血清，小牛血清，一般国产的，效果也还是不错的，不过，最好不要用于细胞培养，这些血清，大多是用于封闭液、保护液、缓冲液等等用途的。

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