骨髓间充质干细胞提取b站（骨髓间充质干细胞的提取）

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求助人脐带间充质干细胞提取方法

方法:

无菌条件下截取流产胎儿双侧四肢骨,PBS冲洗髓腔,离心去脂肪及上清液,L-DMEM重悬细胞,沿管壁缓慢滴加至底部有等量1.073 g/mL Percoll分离液的离心管中,离心后吸取中间界面白膜层,加入含体积分数为10%的胎牛血清、青霉素钠、链霉素的L-DMEM完全培养基,接种后置于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度孵箱内培养.48 h后换液,去除未贴壁细胞,以后每2d换液一次.待细胞达到80%～90%融合时,胰酶-EDTA消化传代.

主要观察指标:

倒置显微镜及Giemsa染色观察细胞形态;透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞技术检测其表面标记物;碱性磷酸酶染色检测成骨分化能力;Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色检测成软骨分化能力.结果:原代及传代培养的胎儿骨髓间充质干细胞呈梭形外观,具有较强的增殖能力.胞体较小,细胞核/浆比例大,胞核呈圆形或椭圆形,胞浆少,染色质较疏松,表现出早期细胞的特点,传至第20代细胞超微结构仍无明显改变.细胞表面抗原CD29,CD44,CD105呈阳性表达,CD34,CD45呈阴性表达.骨髓间充质干细胞诱导分化后,碱性磷酸酶染色及Ⅱ型胶原均呈阳性.

结论:

利用密度梯度离心+贴壁筛选法可成功分离培养胎儿骨髓间充质干细胞,所获细胞能够向成骨细胞及软骨细胞分化,该方法为体外培养扩增胎儿骨髓间充质干细胞的简单、稳定、高效的手段.

什么是牙髓间充质干细胞

牙髓间充质干细胞简介

牙髓间充质干细胞又被称为牙髓干细胞，广泛存在于乳牙、智齿、正畸牙等牙髓组织中的一种多功能细胞，能分化成许多种组织细胞，它可以修复损伤活病变的组织器官，具有较强的免疫调节作用，促进造血功能恢复。

牙髓组织位于牙齿内部的牙髓腔内，是牙体组织中唯一的软组织。2000年Gronthos等通过对人牙髓细胞的研究，发现了一种与骨髓间充质干细胞有着极其相似的免疫表型及形成矿化结节能力的细胞，细胞中形态呈梭形，可自我更新和多向分化，有着较强的克隆能力。这些由牙髓组织中分离出的成纤维状细胞就称为牙髓干细胞(Dental Pulp Stem Cells, DPSCs)。

牙髓干细胞（DPSCs）是一群具有高增殖能力并能形成钙化克隆的细胞。目前来看，DPSCs除了具有外科整形及颌面修复的治疗潜能，还有其他许多疾病的治疗作用。迄今为止，大多数的研究表明，来源于第三磨牙和乳牙的牙髓干细胞可以产生矿化组织、类似牙本质的细胞外基质和结构、牙周韧带和牙髓，以及一些其他的结构。目前，世界研究小组研发了相应的能够获得足够治疗用的细胞数量的牙髓干细胞的提取、扩增并保证细胞质量的标准操作流程。现在讨论更多的是牙髓干细胞的合适的药用方式、临床使用的注意事项以及要一些临床监测的参数。

牙髓干细胞具有多向分化的潜能，它除了能形成矿化结节能力的细胞外，经过不同细胞因子的诱导，还能够分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、血管内皮、肝、神经等细胞系类型。

牙髓干细胞优点

来源丰富。6-11岁的小孩自然脱落的牙齿中、成人需要拔掉的智齿中都含有丰富的牙髓干细胞。

副作用小。牙髓干细胞是一种间充质干细胞，具有间充质干细胞的通性，不仅免疫原性低，不须经过严格配对即可使用，不会引起强烈的排异反应，而且还具有免疫调节功能，异体一直不会引起排斥反应。

无伦理争议。因牙髓干细胞取自小孩自然脱落的牙齿及成人的智齿，属于废弃物品，且不损及生命，不存在伦理上的争议。

牙髓干细胞储存优势

保存修复和再生的能力

牙髓干细胞分化和再生能力是自体骨髓干细胞的三倍，可以用于修复组织和器官病变、损伤，随着医疗技术的发展，家人会拥有更多的健康保障。

一人储存全家受益

自体储存的牙髓干细胞免疫原性低，除用于孩子外，爸爸妈妈、爷爷奶奶、外公外婆等有血缘关系的人都可以使用，无需配型，血缘关系越近，治疗效果越好。未来，也可私人定制专属的干细胞护肤品。

可多次使用

牙齿里含有大量丰富的牙髓干细胞，一颗牙齿可用于100次疾病的治疗，还可以联合脐带血共同治疗血液系统和免疫系统疾病，促进造血功能恢复。

更安全更有效

使用家人储存的牙髓干细胞能够最大限度避免引起免疫排斥和疾病交叉感染的风险。

骨髓巨噬细胞和间充质干细胞的关系

骨髓基质细胞是存在于骨髓中的一类多能干细胞，具有分化成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和其他几种结缔组织细胞（如腱细胞）。亦可转分化成心肌细胞和骨骼肌细胞。骨髓间充质干细胞现已被归为结缔组织成体干细胞。事实上，骨髓基质细胞中的间充质干细胞数量是很少的，约占细胞总数的10万分之一，其定向分化也不均一，现在越来越多的研究揭示骨髓间充质干细胞及其初步分化的祖细胞或称前体细胞(precusor,

progenitor

cells)具有一些特殊的表面蛋白特征；此外，干细胞具有多向分化及自我更新能力，其细胞复制分裂方式是不对称分裂，这明显不同于普通的细胞。通过贴壁法或percoll等细胞分离介质只能获得混合的骨髓基质细胞，只有应用免疫磁珠、流式细胞仪等将其进一步分离纯化后，才能称为骨髓间质干细胞。（河南省干细胞库）

间充质干细胞可以治肾病吗

用骨髓间充质干细胞来治疗肾病是可行的.骨髓间充质干细胞具有归巢的特性,能到达机体损伤的部位进行修复.机制主要是分化代替损伤,坏死,凋亡的细胞或通过旁分泌释放细胞因子干扰组织损伤的进程.

骨髓间充质干细胞可以用于心血管疾病,神经系统疾病,肾脏疾病的治疗.现已有临床实验,但离推广还有一段距离.

间充质干细胞现在主要从骨髓提取,所以叫骨髓间充质干细胞,从其他部位提取对技术有一定要求.

你说的"胎盘中或脐带血中提取的干细胞"与间充质干细胞不是一个概念.前者主要是造血干细胞,用于白血病等疾病的治疗.

干细胞是从自己身上提取的吗？

理论上来讲，人体的任何组织都含有干细胞。为什么这么说呢？因为人体内所有组织中的细胞发生损伤或衰老，进而需要替换时，都会由组织中的干细胞分化出成熟的功能细胞，以替换损伤或衰老的细胞，修复人体组织。

可以说，人体就是由细胞构成的一个复杂社会，社会需要不断更新，维持生机和活力，干细胞就是细胞社会更新的源泉。科学家从多种组织提取成功提取了干细胞。

1、骨髓

骨髓中的造血干细胞发挥了治疗作用。需要注意的是，骨髓中包含两种类型的干细胞。一种是造血干细胞，用于白血病的治疗。

骨髓造血干细胞

一种是间充质干细胞，起初用于治疗造血干细胞移植后发生的移植物抗宿主病，后来发现间充质干细胞是多能干细胞，能够分化为肝脏、大脑、上皮、心肌等多系统的功能细胞，对冠心病、糖尿病、神经损伤、自身免疫性疾病等慢性病都有治疗作用。

2、外周血

3、脂肪

之前，人们很难想象，白白的脂肪中也含有干细胞。

欧洲市场首个获得集中上市 许可（MA）批准的异体脂肪干细胞产品

4、经血

大家可能想不到，“大姨妈”也能被废物利用，从中提取干细胞。经血中能提取的干细胞类型主要是间充质干细胞。

5胎盘和脐带血 脐带和胎盘统称为围产期组织。孩子出生时通常被丢弃的脐带和胎盘含有非常丰富的干细胞。

胎盘体积大，是十月怀胎期间胎儿发育的基地，含有更加丰富的干细胞。韩忠朝院士团队全球最早从胎盘中分离4中类型的干细胞: 亚全能干细胞、间充质干细胞、母亲干细胞、造血干细胞。这些类型的干细胞分别在抗衰老、慢性病、母亲产后疾病、白血病等具有广阔的应用前景。

最后，还有一种干细胞类型，胚胎干细胞，由于是通过非正常的流产途径获取，而且各国都禁止直接用于临床治疗，在此不再介绍。

从骨髓、外周血和脂肪中提取干细胞，均必须进行有创性操作，需要从身体中抽吸骨髓、外周血和脂肪，可能会对人体造成伤害，而且数量有限。从经血和尿液中提取干细胞，数量更加有限，而且很容易发生细菌污染。

从脐带和胎盘，尤其是胎盘，提取干细胞，不仅数量巨大，而且活性高、易于标准化制备、不易发生污染，是目前最理想的干细胞来源。

刚关于干细胞提取，你想知道的都在这

干细胞在医学界被誉为“第三医疗手段”，是区别于传统手术治疗和药物治疗的革命性医疗手段，在治疗各种难治性疾病、罕见病方面具有自己独特的优势。

随着年龄的增长，人体免疫力会逐步下降，此时身体开始出现各种疾病，体内细胞的活性以及数量也会相应减少，身体器官以及机能的修复再生能力下降，此时给身体补充干细胞，组织器官就能得到及时修复，疾病也会很快痊愈。

干细胞是一类具有多项分化潜能和自我复制能力的未分化起源细胞，也被医学界称为“万用细胞”。生老病死的各个阶段都是由细胞所决定的，当体内的细胞数量与质量逐步降低，无法及时有效的替换补充体内衰老病变的功能细胞时，疾病与衰老就会到来。

而干细胞可以利用自身的分化作用修复受损的组织器官，能够分化为身体所需要的组织器官细胞来补充损失的细胞，代替那些衰老受伤的细胞恢复受损组织器官的功能。

干细胞能再生各种人体组织，可以分化成牙周组织、神经等组织细胞，将来还可以用于器官组织的再生，并且还有抗衰老的功效，补充干细胞可以有效去除皱纹，恢复肌肤光泽弹性，有着显著的美容护肤效果。

有哪几种干细胞值得我们提取储存？它们又分别有什么区别和作用？

一、脐带干细胞

脐带干细胞已经成为了具有共识性的，安全有效的间充质干细胞样本来源。脐带干细胞一般指脐带间充质干细胞。

脐带间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它的增殖能力比较强，能分化成许多种组织细胞，做异基因移植的时候，也很少出现排斥的反应，能攻克许多难治性慢性病，还可以修复衰老的组织器官，抵抗人体衰老。

提取并储存脐带干细胞相当于给新生儿及其父母上了一份保险。

二、骨髓、脂肪干细胞

如果在出生时没有储存脐带干细胞，成年后再想储存自己的干细胞就要抽取骨髓干细胞或脂肪干细胞，这两种干细胞是成年人干细胞的最佳来源，其中脂肪干细胞的活性要强于骨髓干细胞。

脂肪干细胞提取过程容易，只需要通过微创在腹部提取20cc的脂肪。先将样本放在–80 °C冰箱过夜，第二天再转移到液氮进行长期储存。脂肪干细胞在体外扩增技术成熟，可以保管30年左右。

干细胞在生命科学、新药试验和疾病研究这三大生物医药领域都有着广泛的运用，不仅在疑难杂症上初露锋芒，也在常见病、医美方面崭露头角。近年来，我国干细胞产业发展迅猛，相信随着生物医学的不断发展

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