制备单克隆抗体多次注射抗原（制备单克隆抗体至少需要哪些细胞）

我们将涵盖制备单克隆抗体多次注射抗原和制备单克隆抗体至少需要哪些细胞的所有方面，并尝试探索两者之间的联系和区别。

在制备单克隆抗体时对小鼠多次注射特定抗原的目的是什么

（1）细胞培养技术和细胞融合技术是单克隆抗体技术的基础．给小鼠注射特定抗原的目的是诱导产生能产生抗体的浆（B）细胞．

（2）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，其最大的优越性是特异性强，灵敏度高，可以体外大量制备．

（3）图中培养基属于选择培养基，用来筛选杂交瘤细胞．

（4）杂交瘤细胞常用的培养方法是体外用培养液培养或注入小鼠腹腔中进行体内培养．

（5）检测鉴定是否产生了所需抗体，可采用抗原抗体分子杂交技术．

故答案为：

（1）动物细胞培养和融合 诱导产生能产生抗体的浆（B）细胞

（2）特异性强，灵敏度高

（3）选择 杂交瘤

（4）注入小鼠腹腔内培养

（5）抗原--抗体杂交（反应）

单克隆抗体制备的基本过程是什么样的？

单克隆抗体的制备，是克隆技术结合于生物制药领域的一种体现。单克隆体抗体的制备过程，就是通过对实验体的培养和筛选，提炼出单克隆抗体的生物实验。

举措建议

1、对实验体注射抗原体蛋白，使实验体具有抗性。

2、将实验体细胞提取并且在培养基中进行筛选试验。

3、在培养基中，只会选择不亲本的融合细胞，得出初步的单体细胞。

4、将单体细胞在体外进行繁殖培养，得出单克隆抗体。

单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法

第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，用连续注射抗原，下面具体介绍一下：

1、在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞；

2、通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。

拓展资料：

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。

参考资料：单克隆抗体百度百科：网页链接

单克隆抗体的制备步骤

过程

1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。

2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。

3）细胞融合的关键:

1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。

2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。

4）阳性克隆的筛选 应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次，均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。

5）克隆化 克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀释法。

（1）显微操作法：在显微镜下取单细胞，然后进行单细胞培养。这种方法操作复杂，效率低，故不常用。

（2）有限稀释法：将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后，按每孔1个细胞接种在培养皿中，细胞增值后成为单克隆细胞系。第一次克隆化时加一定量的饲养细胞。由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化，所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2～3次的再克隆才成。应该注意的是，每次克隆化过程中所有有意义的细胞都应冷冻保存，以便重复检查，避免丢失有意义的细胞。

（3）软琼脂法：将杂交瘤细胞稀释到一定密度，然后与琼脂混悬。在琼脂中的细胞不能自由移动，彼此互不相混，从而达到单细胞培养的目的。但此法不如有限稀释法好。

（4）荧光激光细胞分类法：用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞，然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性选出细胞，并进行单细胞培养。

6）细胞的冻存与复苏

7）大规模单克隆抗体的制备 选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备，因为融合细胞随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。

传统制备抗体的方法是向动物体内反复注射某种抗原

（1）传统制备抗体的方法是向动物体内反复注射某种抗原，使B细胞和记忆细胞增殖、分化为浆细胞，浆细胞产生抗体，然后从动物中分离所需抗体．

（2）诱导动物细胞融合，特有的方法是用灭活的病毒做诱导剂，杂交瘤细胞的特点是即可大量增殖，又能产生特异性抗体．

（3）将得到的能分泌专一抗体的杂交瘤细胞注入到小鼠腹腔中，一段时间后可以从小鼠腹水中提取大量的鼠源性单克隆抗体．

（4）某病人连续隔周注射某种鼠源性单抗治疗一种病毒感染性疾病，开始病毒量明显减少，一段时间后，这种病毒量又开始上升，上升原因可能是病毒发生变异，也可能是人体产生抗鼠源抗体的抗体，中和了鼠源抗体，使鼠源抗体不能发挥抗病毒的作用．

（5）改造鼠源性抗体分子的结构需要用蛋白质工程技术，改造后的鼠源性抗体分子可以降低鼠源性抗体的人体反应．

故答案为：

（1）B细胞和记忆细胞 血清

（2）灭活病毒 即可大量增殖，又能产生特异性抗体

（3）腹水

（4）变异 抗体

（5）蛋白质工程

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