胚胎干细胞体外培养的关键技术（胚胎干细胞体外培养的关键技术有哪些）

通过这份文件，我们希望为你提供有用胚胎干细胞体外培养的关键技术的知识，有效解决你目前面临的问题。

胚胎工程包括哪些技术

胚胎工程包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。

胚胎工程的定义：胚胎工程进一步挖掘动物的繁殖潜力，为优良牲畜的大量繁殖，稀有动物的种族延续提供有效的解决办法。在畜牧业和制药业等领域发挥重要的作用，具有光明的应用前景。

发展史：辅助生育技术的发展史

哺乳动物体外受精技术的研究由来已久，早在1890年，英国胚胎学家Walter Heape和外科医生Samual Ruckley，将安哥拉白色长毛兔两个4-细胞胚胎植入有色短毛雌兔子宫内，生下的6只幼兔中有2只白色长毛兔。宣布胚胎移植的首次成功。

1947年，美籍华人张明觉将兔受精卵保存在5℃-7℃，移植后能发育成正常的幼兔。这些研究均是将体内受精卵进行移植，而体外受精却相当困难。1951年，张明觉和Austin观察到哺乳动物的精子获能现象，即精子有能力穿入卵之前，必须经历一系列的生理，生化改变。

这样张明觉在其研究的基础上，并结合Heape的胚胎移植技术诞生第一只体外受精—胚胎移植的幼兔。这些开创性的研究为人类体外受精—胚胎移植奠定了基础。

20世纪60年代，人类对卵及卵子成熟的研究积累了丰富的知识。随着腹腔镜发明并将其应用于取卵手术中。1977年Steptoe和Edwards利用腹腔镜取卵，在体外受精，并当受精卵发育到8-Cell胚胎移植入母体子宫内获得妊娠。并于1978年7月，在英国剑桥大学诞生了世界首例试管婴儿路易丝.布朗(Louice Brown)即我们一般所说的试管婴儿。

1985年4月台湾首例试管婴儿诞生。1986年12月，香港首例试管婴儿诞生。我国首例试管婴儿于1988年3月北京医科大学三医院诞生。

胚胎分割：

一、定义：采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。

二、原理：初期胚胎的细胞具有很高的全能性，能够发育成完整个体。来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，拥有相同的优良性状。

胚胎干细胞（ES细胞）介导法（转基因动物培育的途径之一），即将外源基因导入胚胎干细胞，然后将转基因的

（1）动物细胞培养时，需要在无菌，温度、pH适宜，营养充足条件下进行，由于人们对细胞所需营养物质还没有搞清楚，因此在培养动物细胞时还需加入适量的动物血清、血浆等天然成分．

（2）图1中①表示将重组质粒导入受体细胞的过程，当受体细胞是动物细胞时，常采用显微注射法．图中②表示导入囊胚时期的胚胎．④为嵌合体小鼠，与通过体外受精技术培养得到的小鼠“试管鼠”相比，嵌合体小鼠中具有遗传物质组成不同的两种细胞，而试管鼠细胞的遗传物质都相同．

（3）一种限制酶只能识别并切割一种特定的核苷酸序列，BamHⅠ和BglⅡ两种限制酶的识别序列不同，但两者切割后形成的黏性末端相同，用DNA连接酶可将两者切割后产生的黏性末端连接起来．因此用这两种酶和DNA连接酶对一段含有多个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的外源基因进行反复的切割和连接操作，若干循环后，明显增多的序列为．

故答案为：

（1）适量的动物血清

（2）显微注射法    囊胚   嵌合体小鼠中具有遗传物质组成不同的两种细胞，而试管鼠细胞的遗传物质都相同

（3）   一种限制酶只能识别并切割一种特定的核苷酸序列

胚胎干细胞培养

实验室用的胚胎干细胞系，是从做试管婴儿等治疗剩下的早期胚胎（囊胚内细胞团）中分离建系得到的稳定传代的体外培养细胞系。

已经分离得到的胚胎干细胞系，是不具备自然发育为胚胎的能力的，不会再移植回人体。

目前在体外可以做到体外受精，并且发育到早期胚胎阶段，像你说的体外把早期胚胎发育为个体的技术叫做人造子宫，目前技术还是无法做到的，只在科幻电影有。

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