间充质干细胞培养要什么血清（间充质干细胞用什么培养基）

我们也将尝试通过更多的实际案例来展示间充质干细胞培养要什么血清和间充质干细胞用什么培养基之间的关系及其各自的特点。 

PALL Ultroser G 胎牛血清替代品——间充质干细胞培养

PALL旗下Ultroser G 血清替代品是一种无血清添加剂，设计用于直接替代现有实验方案中的胎牛血清FBS，支持哺乳动物贴壁细胞的体外无血清培养，与LONZA UltraCULTURE 通用无血清培养基一起使用时，呈现更佳培养效果。Ultroser G 血清替代品自上世纪80年代上市以来，历经30余年，NCBI涉及文章高达一千余篇，获得了广泛验证和认可，在欧美地区经久不衰。

Ultroser G 血清替代品含有丰富的细胞生长、增殖、贴壁所必需的生长因子、粘附因子、结合蛋白、维生素、激素等，以完全取代胎牛血清FBS，其安全性高、稳定性好、价格稳定，满足从研究到商业规模的哺乳动物细胞培养要求，国内常用于间充质干细胞的培养。根据Nathalie Meuleman 等人对间充质干细胞 (MSCs)的研究结论，采用Ultroser G 血清替代品 + UltraCULTURE通用无血清培养基的组合，比采用MEM培养基 + 15%胎牛血清，能获得更好的细胞增殖效果。

从生物活性比较，5%的Ultroser G 血清替代品即可与10%的胎牛血清效果相媲美，并通过评估Hep G2细胞的增殖能力来验证其性能。Ultroser G 血清替代品批次间稳定性高，不含有细菌、真菌、病毒、支原体等污染；产品干粉状，保质期长，2-8℃条件下有效期长达4年。

产品信息

中文名称：Ultroser G 血清替代品

英文名称：Ultroser G Serum Substitute

货号：15950-017

规格：20mL

原产地：法国

品牌：PALL

参考文献

Human marrow mesenchymal stem cell culture: serum-free medium allows better expansion than classical a-MEM medium，Meuleman N et al.，Eur J Haematol 2006: 76: 309–316

PALL Ultroser G 血清替代品更多应用详情，欢迎来电咨询13521452266

——PALL北京一级代理商，北京泽平

用dmem/f12培养细胞,用加血清吗

我培养的也是间充质干细胞，用的是DMEM，需要加血清的，我们实验室所有培养液都是加10%

FBS，可以不加生长因子，如果是胚胎干细胞，可以加bFGF。

细胞培养中常用的血清有哪些，有什么区别

细胞培养中血清的类别：

胎牛血清、透析型胎牛血清 、天然低IGG胎牛血清 、干细胞培养胎牛血清 、特殊用途胎牛血清 、活性炭/葡萄糖处理胎牛血清 、胎牛血清替代物 、小牛血清 、新生牛血清 、加强型小牛血清 、补铁小牛血清 、成牛血清 、供体马血清 、兔血清 、鸡血清 、猪血清 、马血清 、其他动物血清 、合成血清替代品。在细胞培养中最常用的是胎牛血清，胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

细胞培养中血清的作用

提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物.

2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力.

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用.

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源.

5.起酸碱度缓冲液作用.

6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害.

大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养

骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells, BMSCs)是骨髓内除造血干细胞之外的另一类非常 重要的成体间充质干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，具有支持和调控造血的作用，能被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞等多种细胞类型。

大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养技术

  一、实验前准备 

实验开始前，将眼科剪刀、眼科镊子、培养皿，15ml 离心管、移液管、移液枪、枪头等放入无菌超净工作台，以紫外线照射 30min。

1. 选取 SPF 级，体重 100~150g 左右的SD 大鼠，断颈处死。将大鼠置于体积分数为 75%的乙醇中浸泡 5 min。

2. 工作台紫外消毒后，采用通风机通风 3min。以 75%酒精擦拭操作台和双手。

3. 无菌条件下，准备好大剪刀、止血钳、眼科剪刀、眼科镊子、干净培养皿。将大鼠仰卧在超净台内的干净培养皿上。

 二、全骨髓提取  

1. 眼科镊沿腹股沟处提拉大鼠皮肤，眼科剪刀剪开腹股沟皮肤，暴露腿部肌肉，从关节处将大鼠大腿剪下。除去骨表面附着的软组织，置于另一无菌培养皿中。

2. 假如在平时操作中，剪刀不易将骨表面肌肉组织剔除干净，可采用无菌纱布擦拭，可方便的将肌肉组织剔除干净，提高所分离细胞的纯度。

3. 用无菌PBS 浸泡清洗。眼科剪剪断两端骨骺，显露骨髓腔，放置于 10ml 含体积分数为10%胎牛血清的新鲜DMEM 完全培养液的无菌培养皿中，取出 1mL 注射器，用镊子钳起骨头的一端，并用注射器吸取完全培养液冲洗骨髓腔至另一培养皿中，由一段骨髓腔冲出骨髓， 重复 3 次，再反方向冲出骨髓，重复 3 次。直至骨髓腔冲洗液变清亮后停止。

  三、细胞制备

吹打细胞悬液，以便分散细胞，收集骨髓悬液于 15 mL 离心管中，1000 r/min 室温离心5 min。

 四、接种培养  

1. 离心后去上清，用 6mL 完全培养液重悬，轻轻吹打，制成单细胞悬液，转移至 25 cm

2. 培养瓶中，轻轻摇匀;置于 37 ℃、体积分数为 5%的 CO2饱和湿度培养箱中培养。

3. 24 小时后，镜下观察，可见细胞浓度极大，全为球形的大鼠骨髓中的血红细胞，如堆积的沙粒状，悬浮于培养液中并有少量血红细胞相互聚集发生。换液，去除漂浮的血细胞， 以后每两三天换液 1 次，直到增殖达到融合。4. 约 7 天后，倒置显微镜下观察细胞形态与生长情况，可见贴壁细胞数量明显增加，融合达 80%~90%，可进行细胞传代。

  五、细胞传代

待细胞融合至 80%~90%开始传代，吸去培养液，以预热的 PBS 轻轻冲洗后，吸去 PBS。采用消化液消化 1-2 分钟，骨髓干细胞贴壁特性强，比较难于消化，消化液可采用提高EDTA 浓度的方法，镜下可见细胞皱缩变圆，终止消化。本实验的消化液配方可以很好地消化，并不会损伤细胞。除消化液特殊外，其他方法同本光盘内的细胞传代方法。

本实验以 1：2 进行传代。

  六、细胞观察 　

细胞传代到第 3 代时，生长融合后，细胞形态均一，呈长梭形集落样分布，并可重叠生长，细胞纯度可达 95%以上。此时细胞可用于后续实验，或采用表表面标志物进一步验证其纯度：验证标准为CD34 阴性，CD44 阳性。

从本实验结果中可见：全骨髓培养法可分离培养出纯度高、活力旺盛的骨髓间充质干细胞。

  七、注意事项   

1. 缓慢冲洗骨髓腔：

冲洗骨髓腔时为了避免冲起许多气泡损伤细胞，应缓慢冲洗。

2. 严格无菌：

取骨髓间充质干细胞的整个过程都需要谨慎，保证无菌操作

3. 培养基中血清浓度：

过多的血清中细胞因子可以促进细胞增殖，但细胞老化也快。而且一般来说，选择质量好 10%的胎牛血清有利于 MSCs 的培养

4. 原代细胞静置培养：

原代细胞置于培养箱 24～48h 内，应处于静置状态，不宜取出培养瓶观察生长状况，这将使原代分离细胞难以贴壁。

关于间充质干细胞培养要什么血清和间充质干细胞用什么培养基的介绍到此就结束了，不知道你从中找到你需要的信息了吗 ？如果你还想了解更多这方面的信息，记得收藏关注本站。