免疫细胞分离和检测图片（免疫细胞分离方法有哪些）

简述主要免疫细胞分离方法和分离原理？

免疫磁珠法分离细胞原理：

免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。

免疫磁珠法分为阳性分离法和阴性分离法：

阳性分离法－磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞

阴性分离法－磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞

一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。

BD™ Imag 磁珠：

· 大小在0.1－0.45mm

· 包被了何首乌生发BD Pharmingen生产的高质量单抗

· 磁珠已为白细胞亚群的阳性和阴性分离法所优化

· 用于BD™ IMagnet direct magnet

将包被了哺乳期脱发严重怎么调理特异性单抗的BD IMag磁珠加入细胞悬液，磁珠特异性地与有相应抗原的细胞亚群结合，通过BD™ IMagnet direct magnet分离得到的连有BD IMag磁珠的细胞可直接用于功能试验和用流式细胞仪检测。

缺点：

• 对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养

• 纯度低

• 容易阻塞FCM的喷嘴

BD IMag吸收大磁珠和小磁珠分离系统的优点，开发出直径约200nm中等大小磁珠。

• 技术简单，分离在普通的试管中完成

• 易于增大细胞用量

• 对细胞温和，不影响细胞功能及其分离后培养，可直接上流式

• 纯度高，回收率高

• 成本低

此外，Mouse lineage panel中biotin标记的抗体还可用于FCM分析细胞表面抗原，以及进行细胞/组织免疫荧光实验。

BD提供2种免疫磁珠：

· 包被了晚上睡前脸部护理步骤针对白细胞亚群的单抗的磁珠

· 包被了链霉亲和素（streptavidin）的磁珠：此种情况下，在实验系统中加入生物素标记的单抗，磁珠通过streptavidin与生物素标记的单抗结合，单抗与细胞表面相应抗原特异性结合而使细胞被磁珠间接捕获，从而达到分离。这种磁珠使研究者可根据自己需要选择生物素标记的各种单抗去分离目的细胞，应用范围更广泛，使用更灵活。

不同物种磁珠分离试剂

人： CD3, CD4, CD8, CD14, CD19；

小鼠： CD4, CD8a, CD14, CD45R/B220, CD90.2 (Thy1.2), CD11b, Ly-6G.

ë 利用Streptavidin连接的磁珠，只需选配biotin标记的所需单抗,就能分离更多种类细胞

新货聚焦：

现在，BD PMG又推出用于分离小鼠造血干细胞/祖细胞的新试剂mouse lineage panel。

其中包括5种biotin标记单抗，这些单抗能结合小鼠造血细胞的主要分化系细胞: T、B淋巴细胞，单核/巨噬细胞，粒细胞和红细胞。将这组试剂与Streptavidin Plus BD™ IMag Particles (557812) 联合使用，就能通过免疫磁性分离法去除小鼠骨髓造血细胞的主要分化系细胞，从而富集到造血干细胞和祖细胞（阴性片断）。

Mouse Lineage Panel（559971）：（5×2ml/vial） 可分离109 Mouse骨髓细胞

1) Biotin-anti-mouse CD3e (CD3 e chain)；

2) Biotin-anti-mouse CD11b；

3) Biotin-anti-mouse CD45R/B220；

4) Biotin-anti-mouse Ly-6G and Ly-6C (Gr-1)；

5) Biotin-anti-mouse TER-119/Erythroid Cells (Ly-76)

磁分离细胞的重要指标是：

纯度和得率，这取决于磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小（磁性），然而太大的磁珠会影响细胞活性，也无法直接上流式。

目前市场上有2种磁性细胞分离系统：

* Small particles (≈50 nm) － MACS

* Large particles (1200~4500 nm) －others（如Dynal）

小磁珠 优点：

• 对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养

• 可直接上流式检测，不影响散射光

缺点：

• 需要很强的磁场来分离细胞

• 分离速度很慢，得率不高

• 需要一次性的分离柱，不能在普通试管进行

• 成本昂贵

大磁珠

• 技术简单，分离可在试管中完成

• 易于增减细胞用量

• 速度快，得率高

• 成本低

细胞免疫的过程？（详细）

细胞免疫过程

T淋巴细胞介导的免疫应答是一个连续的过程，可分为三个阶段：（1）T淋巴细胞特异性识别抗原（初始或记忆T细胞膜表面的受体与APC表面的抗原肽-MHC复合物特异性结合的过程）；（2）T细胞活化、增殖和分化；（3）效应T细胞发挥效应。

T细胞的活化需要双信号的刺激，第一信号来自抗原，提供方式是APC表面的抗原肽-MHC复合物与受体的相互作用和结合，该信号确保免疫应答的特异性；第二个信号是微生物产物或非特异性免疫针对微生物的应答成分，该信号确保免疫应答在需要的条件下才能得以发生。当只有第一信号时，T细胞处于无应答状态。

免疫细胞分类及分离方法是什么？

免疫细胞（immune cell）主要是指能识别抗原，产生特异性免疫应答的淋巴细胞等。淋巴细胞是免疫系统的基本成分，在体内分布很广泛泛，主要是T、B淋巴细胞受抗原刺激而被活化（activation），分裂增殖、发生特异性免疫应答。除T淋巴细胞和B淋巴细胞外，还有K淋巴细胞和NK淋巴细胞，共四种类型。T淋巴细胞是一个多功能的细胞群。除淋巴细胞外，参与免疫应答的细胞还有浆细胞、粒细胞、肥大细胞、抗原呈递细胞及单该吞噬细胞系统的细胞。免疫细胞分离技术

1、淋巴细胞的分离

取肝素抗凝血1m1 加Hanks 液1m1 稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1 淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合，然后2000r／min 水平离心20min，管内分为4 层，自上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。用毛细管伸至单个核细胞层中(位于细胞分离液与血浆的界面上)，沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks 液洗两次，每次2000r／min 离心10min，最后用RPMI l640 培养液将细胞配成2×106／m1 的细胞悬液备用。

2、T 细胞及B 细胞的分离

将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B 细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMI l640 培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T 细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B 细胞，并用少量的RPMI l640 培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的B 细胞。尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。

3、CD4 细胞及CD8 细胞的分离

（1）CD4 细胞的分离：将一定量的T 细胞悬液通过一根SephDdexC—10 柱，然后用少量的RPMll640 培养洗涤，收获的细胞悬液约含85％的CD4 细胞。

（2）CD8 细胞分离：用Tris 缓冲液稀释羊抗鼠IgG(浓度为10μg／m1)包被一平皿表面，然后放置4℃过夜，没有包被上的抗体用PBS 洗净。然后将已标记有抗CD8 单克隆抗体的T 细胞(细胞浓度为1×l07／m1)3m1 加入上述的平皿内，4℃放置2 小时，用PBS 轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1 PBS 吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMI l640 培基中备用。CD4 细胞亦可用此法分离。

4、单核巨噬细胞的分离

单核巨噬细胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴细胞则无此特性，借此可将这两类细胞分开，其方法简述如下。将待分离的细胞悬液(如实物动物的腹腔液)加入适当大小的塑料或玻璃平皿内，置于37℃ C02 温箱内温育1 小时，然后用RPMI 1640 培基轻轻漂洗平皿表面，去除非粘附细胞，再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷，收集粘附的单核巨噬细胞。如果要获得纯度较高的单核巨噬细胞，可重复上述过程。

了解了“免疫细胞”，那么它的具体的操作流程究竟是怎样的呢？

我们都知道现在有一种自体免疫细胞疗法，主要是通过提取患者体内不成熟的免疫细胞，也就是采血，然后在实验室中进行培养使其具有一定能力后，再输回到患者体内。那么你是否了解它的临床操作流程具体是怎样的呢？

下面我们就带大家来看看具体的操作流程吧：

一、细胞采集前的评估与准备

1.掌握患者心理特点。

在细胞采集前我们要向患者及其家属讲解本次治疗的目的以及治疗的基本操作流程，让患者更多的了解可能会出现的副作用和需要配合的注意事项，使它有更多的心理准备，可以减轻思想顾虑并且签署知情同意书。

2.必查项目：血常规、传染病八项（乙肝五项、梅毒、艾滋、丙肝）。

3.血管的准备：要选择比较大、粗、直、而且不容易滑动、弹性好的血管，避免在有静脉炎、擦伤、硬结、瘢痕、皮肤有破损处进针。

4.保证充足的睡眠，避免受凉，预防感冒。

5.饮食指导：

(1)采集前1天患者需注意饮食，禁止食用油腻的食物，要保持饮食的清淡，最好是富含铁、钙类的食物。

(2)患者采集细胞的当天可以进食，但是需要根据采集的时间和病情，然后在早餐或中餐中食用含适量盐份的汤类、牛奶200〜400ml或普通的食物。

(3)采集前20分钟需要口服10%葡萄糖酸钙注射液10〜20ml左右，这样可以采集时出现预防枸橼酸的反应，例如口服葡萄糖酸钙液体可以根据患者血糖指数及个人习惯加入葡萄糖液改善口感。

6.要嘱咐患者在采集当天携带住院病历或门诊系列检查报告单。

　 　二、细胞采集

1．细胞采集前我们要准备一次性的50 ML的注射器一只，一次性7号或12号静脉采血针一个，还有无菌布一块，抗凝剂（肝素钠（12500U /2 ml））一支。

2在这之前，我们要仔细查看检验报告单和知情同意书，认真核对病人信息以及治疗方案，确认没有错误后，就可以开始填写注射器上的标识了。

3.标识需要标明病人信息，然后贴在注射器上，注意不要覆盖刻度；然后就可以准备无菌治疗盘，放上备采集的血样进行备用。

4.在采血前还要最后一次的对病人信息再次进行核对，以免出现错误。

在选择穿刺血管的时候：我们常规情况下都是选则取肘部粗大的血管，例如贵要静脉、正中静脉或头静脉（避开瘢痕及皮损）。

5.采血过程中要严格执行无菌技术的操作，按照常规浅静脉穿刺技术进行穿刺。

　 　三、采集后处理

1.在对病人采血完毕后，要迅速拔出采血针，然后按压穿刺点5－10分钟后，检查一下穿刺点在没有出血情况后，就可以将患者送回病房了，此时要嘱咐病人需要卧床休息30－60分钟，可以适当的饮用一些温开水；然后将采血针内的血液抽到注射器内，套回针套，旋紧，将管打结、固定完成后即可。

2.最后要再次认真核对注射器上的标识信息，确认无误后，将血样放在无菌布里包裹好，在装在运送箱里，进行严实的封闭。结束后，就可以嘱咐外送人员将血样送到实验室里进行分离和培养。

3.分离和结束后，就可以将免疫细胞治疗单和相关检验报告复印件随血标本一起送回实验室存档。

　 　四、细胞培养

我们细胞培养的过程一定要严格在符合国家规定的无菌GMP细胞操作室里进行。

　细胞培养成分和添加物（培养液、细胞因子、血清等）以及制备过程所用的全部耗材的来源和质量认证，都必须符合临床使用的质量要求，一定要采用无动物血清培养基来进行细胞培养。

[if !supportLists]五、[endif] 控制 细胞质 量的稳定

控制细胞的质量主要分为两大步，一是检定细胞，二是检测细胞外源因子。

(一）每批免疫细胞的检定 ：

(1)首先要控制细胞的数量和存活率：细胞的数量至少要满足临床的最低要求，而且存活率应必须满足不低于85%。

(3)另外我们还需要进行无菌试验：每批培养的体细胞在患者输注前都要进行无菌试验，这样才能保证输进去的细胞是无携带病菌并且高质量的。

(4)之后还要检测体内细胞的纯度和均一性。

(5)最后还要检测细胞生物学的效应。

　 　(二）体细胞制品外源因子的检测包括：细菌、真菌、支原体和内毒素。

　 　六、细胞回输

细胞回输属于 静脉输注治疗 ：主要是由临床科室的护士负责的。

当我们的治疗时间到了第15天之后，我们就可以开始按照生物免疫治疗中心出示的《细胞回输计划单》的相应要求进行细胞回输了。其中具体的回输细胞的类型将视患者病情决定。

总结：

以上就是免疫细胞疗法的具体流程了，相信大家看了之后对此都有了一定的了解，如果想要更多的了解一下，欢迎来联系我们呦！

免疫细胞分类及分离方法

免疫细胞的分类有：

T细胞

B细胞

NK细胞

巨噬细胞

树突状细胞

非造血细胞

一、白细胞的分离 自然沉降法 聚合物加速沉淀法

二、淋巴细胞 粘附贴壁法 吸附柱过滤法 磁铁吸引法

三、吞噬细胞 percoll分离法