脐带血干细胞如何分离培养（脐带干细胞培养流程）

求助人脐带间充质干细胞提取方法

方法:

无菌条件下截取流产胎儿双侧四肢骨,PBS冲洗髓腔,离心去脂肪及上清液,L-DMEM重悬细胞,沿管壁缓慢滴加至底部有等量1.073 g/mL Percoll分离液的外泌体标志物的Westernblot检测步骤离心管中,离心后吸取中间界面白膜层,加入含体积分数为10%的干性皮肤在家怎么护理胎牛血清、青霉素钠、链霉素的L-DMEM完全培养基,接种后置于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度孵箱内培养.48 h后换液,去除未贴壁细胞,以后每2d换液一次.待细胞达到80%～90%融合时,胰酶-EDTA消化传代.

主要观察指标:

倒置显微镜及Giemsa染色观察细胞形态;透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞技术检测其表面标记物;碱性磷酸酶染色检测成骨分化能力;Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色检测成软骨分化能力.结果:原代及传代培养的胎儿骨髓间充质干细胞呈梭形外观,具有较强的增殖能力.胞体较小,细胞核/浆比例大,胞核呈圆形或椭圆形,胞浆少,染色质较疏松,表现出早期细胞的特点,传至第20代细胞超微结构仍无明显改变.细胞表面抗原CD29,CD44,CD105呈阳性表达,CD34,CD45呈阴性表达.骨髓间充质干细胞诱导分化后,碱性磷酸酶染色及Ⅱ型胶原均呈阳性.

结论:

利用密度梯度离心+贴壁筛选法可成功分离培养胎儿骨髓间充质干细胞,所获细胞能够向成骨细胞及软骨细胞分化,该方法为体外培养扩增胎儿骨髓间充质干细胞的简单、稳定、高效的手段.

求教脐带血分离造血干细胞的步骤和冻存方法

国家规定脐带血必须在采集后的24小时内进行检测、制备、冻存等一系列的医学工序，需要很专业的技术和专业的设备。

怎么保存脐带血,流程是什么？

脐带血从采集到存储的正规流程。

1、脐带血采集：时间为上，慎密零误差

婴儿出生有顺产和剖腹产，所以脐带血的采集地点不是在医院的产房就是在手术室里进行。由有脐带血采集资质的医护人员操作，在婴儿出生后，脐带被剪断后胎盘还没有离开母体的时候，从连着胎盘的那端脐带采集脐带血，整个过程需要1-2分钟的时间，不会影响胎儿的正常出生与母亲的产后休息。

除了冰箱的水一打开就结冰脐带血还会采集6ml母亲外周血用于后续的检测。

在采集人员结束采集工作之后，脐带血交由专职取血员使用专用的取血车在24小时内送往脐带血库。同时取血员还要对取血箱的温度进行连续监测，温度必须在4-25度之间才为安全温度，还要定期的做温度保持的功能性测试，以保证脐带血的质量与安全性。

脐带血是怎么制备的呢？

脐带血的制备是将脐带血经过密度梯度离心，去除红细胞和血浆，提取造血干细胞的过程。北京脐带血造血干细胞库率先引进全自动脐带血制备系统，整个制备流程是在全封闭的系统中进行，在确保脐带血制备过程的安全的前题下，提高有核细胞的回收率和分离效果的稳定性。

脐带干细胞如何采集？

脐带干细胞，其中最重要的是脐血造血干细胞，即从生产后脐带中遗留的血液里提取，和一般抽血一样，注射器抽取脐带血（注意这时候已经断开脐带），然后无菌保存运输到达实验室通过相应细胞技术，提取其中的有效细胞。但需要强调的一点，血液是及其被污染的一种物质，一旦污染，抽取的全部血液也将被污染（这不同于组织），所以全程的无菌操作是极为重要的。另外还想说的一点是，脐血是相当宝贵的，研究及临床生产都发现脐带中的血液自然地流回到新生儿体内（新生儿产出后3-5分钟后再断脐）可以有效降低新生儿贫血的发生。