细胞储存:流式细胞术固定后的储存指南
细胞储存:流式细胞术固定后的储存指南
前言
流式细胞术是一种强大的技术,用于分析细胞的各种特征。为了在流式细胞术分析后的储存和后续研究中保持细胞的完整性和特性,适当的细胞固定和储存至关重要。
固定方法
1. 戊二醛 (PFA):PFA 是一种常用的交联剂,可稳定蛋白质和核酸分子。通常以 1-4% 的浓度使用,作用时间为 15-60 分钟。
2. 甲醇:甲醇是一种变性剂,可破坏细胞膜,使内含物外露。通常以 -20℃ 预冷,作用时间为 10-30 分钟。
3. 丙酮:丙酮也是一种变性剂,可保留细胞内的某些抗原和荧光标记。通常以 -20℃ 预冷,作用时间为 5-10 分钟。
细胞储存
1. 磷酸盐缓冲液 (PBS):PBS 是一种生理盐水溶液,可维持细胞的渗透压。细胞可在 4℃ PBS 中储存数小时。
2. 含血清培养基:含血清培养基可提供细胞生长所需的营养物质。细胞可在含有 10-20% 血清的培养基中储存数天。
3. 冷冻:冷冻可使细胞长期保存。使用含 DMSO 或其他冷冻保护剂的培养基将细胞缓慢冷冻至 -80℃ 或液氮中。
储存注意事项
1. 避免冰冻融解循环:冰冻融解循环会导致细胞损伤和死亡。在储存过程中尽量避免对细胞进行重复冰冻和融解。
2. 保持低温:细胞应在低温(4℃ 或 -80℃)下储存,以最大程度地减少变质。
3. 防止污染:储存的细胞应保持无菌,以避免污染。使用无菌容器和溶液,并定期检查是否存在污染迹象。
4. 定期监测:定期监测储存的细胞以确保其活性、完整性和标记的稳定性。
5. 优化固定和储存方案:根据具体的细胞类型和研究目的,优化固定和储存方案至关重要。进行试验证明以确定最佳条件。
应用
流式细胞术后细胞储存广泛应用于:
1. 延迟分析:细胞可在固定和储存后进行分析,提供抗体标记和细胞特性的快照。
2. 治疗监测:储存的细胞可用于跟踪治疗反应,监控细胞群的动态变化。
3. 生物标志物发现:储存的细胞可用于探索新的生物标志物,促进疾病诊断和治疗。
4. 细胞保存:冷冻储存的细胞可用作细胞库,用于未来的实验和研究。
结论
通过遵循适当的固定和储存方法,可以保持流式细胞术分析后细胞的完整性和特性。这使研究人员能够进行延迟分析、监测治疗反应、发现生物标志物以及保存细胞用于未来的研究。优化固定和储存方案对于获得可靠和可重复的结果至关重要。
标签: 细胞储存价格影响因素
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