在酒精中保存小麦粒细胞：一种可靠且实用的方法

细胞储存价格影响因素 2024年03月23日 20:13 65 im

　　引言

　　细胞储存是生物学研究和应用中的一项关键技术。小麦粒细胞是一种多功能细胞系，广泛用于各种实验和治疗应用。为了长期保存小麦粒细胞，酒精保存法是一种可靠且实用的方法。本指南将详细介绍使用酒精保存小麦粒细胞的步骤，包括必要材料、技术细节和故障排除建议。

　　材料

　　小麦粒细胞悬液

　　无菌 70% 异丙醇

　　无菌培养基（含血清）

　　无菌离心管（50 ml 和 15 ml）

　　移液器和移液管

　　涡旋振荡器

　　冰浴

　　超低温冰箱（-80℃）

　　步骤

　　1. 收集和计数小麦粒细胞

　　收集新鲜的小麦粒细胞悬液，并计数细胞密度。调整细胞悬液至 1×10^6 cells/ml 的浓度。

　　2. 逐步加入异丙醇

　　向细胞悬液中缓慢滴加等体积的无菌 70% 异丙醇，轻轻搅拌以混合。每滴加 1 ml 异丙醇，涡旋混合 30 秒。这是一个关键步骤，有助于防止细胞破裂。

　　3. 离心和去除上清液

　　将细胞悬液在 4℃，1200 rpm 离心 5 分钟。小心地去除上清液。

　　4. 重悬细胞

　　用无菌培养基重悬细胞沉淀，达到 1×10^6 cells/ml 的浓度。

　　5. 逐步降低异丙醇浓度

　　向细胞悬液中逐步加入等体积的无菌培养基，轻轻搅拌以混合。每滴加 1 ml 培养基，涡旋混合 30 秒。这个步骤有助于进一步稀释异丙醇，防止对细胞造成伤害。

　　6. 最终离心

　　将细胞悬液在 4℃，1200 rpm 离心 5 分钟。小心地去除上清液。

　　7. 重悬和分装

　　用无菌培养基重悬细胞沉淀，达到所需的浓度（通常为 1-5×10^6 cells/ml）。将细胞分装至无菌 15 ml 离心管中，每管体积为 1 ml。

　　8. 冷冻

　　将细胞缓慢冷却至 -20℃，保持 24 小时。然后转移至超低温冰箱（-80℃）长期储存。

　　故障排除

　　细胞存活率低：确保异丙醇浓度为 70%，并缓慢逐步加入异丙醇和培养基。

　　细胞聚集：涡旋剧烈或过频会引起细胞聚集。轻轻涡旋并在步骤 5 中加入培养基时，小心混合。

　　细胞破裂：异丙醇加入过快或培养基稀释过快会导致细胞破裂。严格按照步骤操作，以避免细胞损伤。

　　冻存后细胞难以复苏：确保缓慢冷却至 -20℃，然后转移至 -80℃ 超低温冰箱进行长期储存。

　　结论

　　使用酒精保存法储存小麦粒细胞是一种简单且可靠的方法，可保持细胞活性并延长其使用寿命。通过遵循本指南中概述的步骤，研究人员可以成功地保存小麦粒细胞以供未来的实验和应用。

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