细胞污染分几种情况,处理方法不同。
细菌污染处理方法:
在培养基中加入抗生素处理,可以用四环素,庆大霉素,或者链霉素,前两者的工作浓度是50 μg/mL;链霉素的工作浓度是100 μg/mL。但是,细胞本身也有影响,状态大不如从前,所以,防范于未然,正确操作、严格执行无菌操作规范,定期清理消毒培养设施才是关键!
二、真菌污染
:真菌污染培养液清亮透明。
处理方法:赶紧扔掉,不要再想挽救,即使再珍贵。然后彻底消毒灭菌培养间,CO2孵箱,器皿和培养液。
三、霉菌污染
同真菌感染一致,因为培养液是清亮的,所以霉菌污染早期难以发现,等发现时往往已经为时过晚了。培养液中慢慢地出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物。
处理方法:建议果断舍弃该污染细胞,将环境彻底消毒,因为霉菌的顽固可能会导致下几批细胞都会污染,所以,采用酒精彻底底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新洁尔灭擦洗一遍,把水盘里加上饱和量的硫酸铜。千万不可大意!
四、支原体感染
:培养液变浑浊,支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是细胞状态变差、生长变慢,在显微镜下观察可能会有小黑点。
处理方法:
如果不是很珍贵的细胞的话,建议直接扔了吧。还是那句话,预防为主。
1 霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。一般肉眼可见,较易倍发现,短期内培养液多不浑浊,倒置显微镜下可见细胞之间有纵横交错穿行的丝状、管状及树枝状菌丝,并悬浮漂荡在培养液中。很多菌丝在高倍镜下可见到有链状排列的菌株;念珠菌或酵母菌形态呈卵形,散在细胞周边和细胞之间生长。有时通过显微镜观察可能发现瓶底外面生长的菌丝,不要错当培养瓶内的污染。瓶外的污染物,需及时用乙醇棉球擦洗清除,以防其通过瓶口传入瓶内。
2 培养细胞的污染一旦明确,多数将无法救治。如果污染的细胞不是具有重要价值,一般发现污染后应尽快弃之,以防污染扩大影响其他细胞。
3 如为霉菌污染可以考虑采用制霉菌素25ug/ml或酮康唑10ug/ml对细胞进行处理。
1、细胞存在污染,污染早期可以见到细胞生长;
2、不排除传代时细胞密度过大,或者操作不当导致多数细胞不贴壁,大量细胞漂浮。
3、细胞破碎。
细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及非细胞污染.他们在细胞培养中污染的特点如下:
1、细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显.
2、支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一.而且它不能用过滤的办法除去.支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去.
3、黑胶虫:可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的.常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象.对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理.
4、真菌:一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物.真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了.
5、原虫:培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮.他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养.这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环.
6.病毒:组织细胞培养过程中,如果没有除去潜在的病毒,就会产生病毒污染.目前,从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒.尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的.因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题 。
7、非同种细胞污染 :即是细胞交叉污染,由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染.目前,世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效.非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致.
关键词:细胞被真菌污染怎么办