免疫细胞培养过程视频（细胞免疫教学视频）

本文目录一览：

• 1、了解了“免疫细胞”，那么它的具体的操作流程究竟是怎样的呢？
• 2、细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
• 3、细胞免疫的过程？（详细）

了解了“免疫细胞”，那么它的具体的操作流程究竟是怎样的呢？

我们都知道现在有一种自体免疫细胞疗法，主要是通过提取患者体内不成熟的免疫细胞，也就是采血，然后在实验室中进行培养使其具有一定能力后，再输回到患者体内。那么你是否了解它的临床操作流程具体是怎样的呢？

下面我们就带大家来看看具体的操作流程吧：

一、细胞采集前的评估与准备

1.掌握患者心理特点。

在细胞采集前我们要向患者及其家属讲解本次治疗的目的以及治疗的基本操作流程，让患者更多的了解可能会出现的副作用和需要配合的注意事项，使它有更多的心理准备，可以减轻思想顾虑并且签署知情同意书。

2.必查项目：血常规、传染病八项（乙肝五项、梅毒、艾滋、丙肝）。

3.血管的准备：要选择比较大、粗、直、而且不容易滑动、弹性好的血管，避免在有静脉炎、擦伤、硬结、瘢痕、皮肤有破损处进针。

4.保证充足的睡眠，避免受凉，预防感冒。

5.饮食指导：

(1)采集前1天患者需注意饮食，禁止食用油腻的食物，要保持饮食的清淡，最好是富含铁、钙类的食物。

(2)患者采集细胞的当天可以进食，但是需要根据采集的时间和病情，然后在早餐或中餐中食用含适量盐份的汤类、牛奶200〜400ml或普通的食物。

(3)采集前20分钟需要口服10%葡萄糖酸钙注射液10〜20ml左右，这样可以采集时出现预防枸橼酸的反应，例如口服葡萄糖酸钙液体可以根据患者血糖指数及个人习惯加入葡萄糖液改善口感。

6.要嘱咐患者在采集当天携带住院病历或门诊系列检查报告单。

　 　二、细胞采集

1．细胞采集前我们要准备一次性的50 ML的注射器一只，一次性7号或12号静脉采血针一个，还有无菌布一块，抗凝剂（肝素钠（12500U /2 ml））一支。

2在这之前，我们要仔细查看检验报告单和知情同意书，认真核对病人信息以及治疗方案，确认没有错误后，就可以开始填写注射器上的标识了。

3.标识需要标明病人信息，然后贴在注射器上，注意不要覆盖刻度；然后就可以准备无菌治疗盘，放上备采集的血样进行备用。

4.在采血前还要最后一次的对病人信息再次进行核对，以免出现错误。

在选择穿刺血管的时候：我们常规情况下都是选则取肘部粗大的血管，例如贵要静脉、正中静脉或头静脉（避开瘢痕及皮损）。

5.采血过程中要严格执行无菌技术的操作，按照常规浅静脉穿刺技术进行穿刺。

　 　三、采集后处理

1.在对病人采血完毕后，要迅速拔出采血针，然后按压穿刺点5－10分钟后，检查一下穿刺点在没有出血情况后，就可以将患者送回病房了，此时要嘱咐病人需要卧床休息30－60分钟，可以适当的饮用一些温开水；然后将采血针内的血液抽到注射器内，套回针套，旋紧，将管打结、固定完成后即可。

2.最后要再次认真核对注射器上的标识信息，确认无误后，将血样放在无菌布里包裹好，在装在运送箱里，进行严实的封闭。结束后，就可以嘱咐外送人员将血样送到实验室里进行分离和培养。

3.分离和结束后，就可以将免疫细胞治疗单和相关检验报告复印件随血标本一起送回实验室存档。

　 　四、细胞培养

我们细胞培养的过程一定要严格在符合国家规定的无菌GMP细胞操作室里进行。

　细胞培养成分和添加物（培养液、细胞因子、血清等）以及制备过程所用的全部耗材的来源和质量认证，都必须符合临床使用的质量要求，一定要采用无动物血清培养基来进行细胞培养。

[if !supportLists]五、[endif] 控制 细胞质 量的稳定

控制细胞的质量主要分为两大步，一是检定细胞，二是检测细胞外源因子。

(一）每批免疫细胞的检定 ：

(1)首先要控制细胞的数量和存活率：细胞的数量至少要满足临床的最低要求，而且存活率应必须满足不低于85%。

(3)另外我们还需要进行无菌试验：每批培养的体细胞在患者输注前都要进行无菌试验，这样才能保证输进去的细胞是无携带病菌并且高质量的。

(4)之后还要检测体内细胞的纯度和均一性。

(5)最后还要检测细胞生物学的效应。

　 　(二）体细胞制品外源因子的检测包括：细菌、真菌、支原体和内毒素。

　 　六、细胞回输

细胞回输属于 静脉输注治疗 ：主要是由临床科室的护士负责的。

当我们的治疗时间到了第15天之后，我们就可以开始按照生物免疫治疗中心出示的《细胞回输计划单》的相应要求进行细胞回输了。其中具体的回输细胞的类型将视患者病情决定。

总结：

以上就是免疫细胞疗法的具体流程了，相信大家看了之后对此都有了一定的了解，如果想要更多的了解一下，欢迎来联系我们呦！

细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

一、细胞复苏

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。

加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

二、细胞传代

细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。

加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

三、细胞冻存

细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。

加入lml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。

冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

注意事项

（1）进入细胞间开始细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作：

①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。

②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。

④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

（2）细胞污染的预防

①实验用品防止污染。细胞培养所用试剂、耗材、器材的清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌要仔细，并在无菌实验检测阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁、消毒、灭菌。

②操作过程防止污染。

③穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物必须更换为白大褂后才能进入细胞间。

④实验开始前需要确定戴的手套没有问题，只要接触过生物安全柜之外的物品，必须及时对手套进行消毒。

⑤进入细胞培养间后关好门，坐下来尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。事先要严格检查所用的器材、溶液和细胞，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大规模污染。

⑥细胞操作时动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口放在火焰周围简单转动烧灼，注意不要让火焰把塑料瓶口烧化。

⑦实验操作时生物安全柜的隔板要尽可能放低，尽量减少谈话，打喷嚏或咳嗽时绝对不能对着工作区，以免造成不必要的污染。

⑧瓶盖应当倒放在远离自己的地方，以避免瓶盖被误操作所污染。

⑨不要从敞开的容器口上方经过，以避免衣服上掉落不明物体对细胞的污染。

⑩实验操作时要注意及时更换巴斯德吸管、移液枪枪头和移液管，切勿一根管子做到底。一旦发现接触了非洁净或者无法确定洁净的物品必须直接丢弃。实验完毕应及时收拾，保持实验室清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

（3）防止细胞交叉污染

①在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，最好作上标记便于辨别。按顺序进行操作，一次只处理一种细胞，多种细胞多种操作一起进行时易发生t昆乱。

②在进行换液或传代操作时，粘有细胞的移液枪头和移液管不要触及试剂瓶瓶口，以免把细胞带到培养基中污染其他细胞。

③所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，必须及时保种冻存，一旦发生污染可重新复苏细胞，继续培养。

扩展资料：

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。

不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。

细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

参考资料：百度百科：细胞培养

细胞免疫的过程？（详细）

细胞免疫过程

T淋巴细胞介导的免疫应答是一个连续的过程，可分为三个阶段：（1）T淋巴细胞特异性识别抗原（初始或记忆T细胞膜表面的受体与APC表面的抗原肽-MHC复合物特异性结合的过程）；（2）T细胞活化、增殖和分化；（3）效应T细胞发挥效应。

T细胞的活化需要双信号的刺激，第一信号来自抗原，提供方式是APC表面的抗原肽-MHC复合物与受体的相互作用和结合，该信号确保免疫应答的特异性；第二个信号是微生物产物或非特异性免疫针对微生物的应答成分，该信号确保免疫应答在需要的条件下才能得以发生。当只有第一信号时，T细胞处于无应答状态。