293t细胞培养说明书（293t细胞用什么培养基培养）

本文目录一览：

• 1、293T细胞的培养实验步骤谁能介绍下，谢谢大家！
• 2、293t是什么细胞？
• 3、如何养293、293T系列的细胞？
• 4、新手293T细胞的培养
• 5、293T 细胞培养要注意什么
• 6、求助 293T细胞培养

293T细胞的培养实验步骤谁能介绍下，谢谢大家！

293T细胞的冻存

1.

随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降，出现突变等。所以要在细胞购进时就进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。

2.

在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。

3.

倒去细胞上清液，加入D-Hank's液洗去残留的培养基。

4.

加入0.25%的胰酶，消化10-20s后倒去。

5.

镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，加入新鲜培养基吹打混匀。

详细的步骤可以到生物帮了解下，

生命科学研究成果,分子,细胞生物学研究进展,生命科学研究进展。

293t是什么细胞？

肾上皮细胞。

293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高，转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式。

扩展资料：

注意事项：

在原代培养初期，培养液的含量在3ML以下，最适宜的为1-1.5ML，仅够保持植块湿润即可。

在扔入垃圾前，应该用次氯酸盐处理剩余组织和使用过的试管、吸管、培养皿。

培养液需要在无菌的环境下才能打开，避免污染。

参考资料来源：百度百科-肾小管上皮细胞

如何养293、293T系列的细胞？

将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM，混匀，不能吹打，分装2瓶。

如果细胞没长满就脱落，则只需加入5mlMEM，不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固，培养基上清没有细胞脱落碎片，且细胞长满达到80％以上，吸走培养基，加入5ml的PBS+EDTA(0.02%)，迅速轻微晃动，竖立培养瓶，吸走，加入1ml0.05%胰酶，37度消化不超过3min。

扩展资料：

注意事项：

1、尽量用早期的细胞，传代太多状态不好，产毒也不好，贴壁困难。

2、塑料的瓶子，DMEM +10%的小牛血清即可，要求并不高，ATCC上有详细的培养方法。

3、主要是传代，胰酶消化点到即止，不能和其它成纤维细胞一样。

4、细胞代数越高生长越快，同时性状和原代差别也更大。一般2-3天传代一次比较合适。

5、传代时细胞密度在80%左右比较好，如果超过90%融合再传会影响细胞状态。

参考资料来源：百度百科-293细胞

新手293T细胞的培养

在所有的细胞离体培养中，最困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。

⑴血清：动物细胞离体培养常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子，如激素、微量元素、矿物质和脂肪。有一天人们真正学会了配制和血清一样的培养液，那时血清才可被取代。在这里，血清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。

⑵支持物：大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃，塑料等作为支持物。

⑶气体交换：二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节，不断维持所需要的气体条件，每一次开箱操作后的快速恢复对设备的要求可想而知有多难？由此决定了动物细胞离体培养设备要求高、投资大。 ⑴光照：离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格，因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关，而且与细胞分化有关，例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用，所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中，光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质，如药物的过程，植物细胞大多是在反应器中悬浮培养。

293T 细胞培养要注意什么

原代动物细胞培养：

1、实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。

2、无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。

3、用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。

贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。

4、培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。

传代细胞培养：

1、无菌操作

2、控制消化时间

3、及时关注细胞生长状态

求助 293T细胞培养

293T细胞的培养 ：

293T细胞是由293 细胞派生, 表达SV40 大T抗原的人肾上皮细胞系, 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白, 或是用以包装病毒。 293T 为贴壁细胞, 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。

培养条件为:

完全培养基: 高糖 DMEM, 10% 胎牛血清; 冻存液: 胎牛血清或完全培养基, 10% DMSO。

传代方法为:

1．吸掉293T 细胞培养瓶内的培养液;

2．吸取适量的无Ca2+ 和Mg2+ 的PBS, 轻轻把贴壁的细胞洗两遍;

3．加少量的0.05% 胰蛋白酶-EDTA (一般25 cm2 的培养瓶加1 ml, 75 cm2 的培养瓶加2~3 ml), 放到培养箱温育20 s;

4．细胞消化完毕, 加适量培养液终止消化, 并吹打细胞, 制成均匀的细胞悬液;

5．加足量的培养液, 分装到新的培养瓶中。值得注意的是, 293T细胞的贴壁性不强, 轻微的干扰就可能使它们脱落。所以, 在更换新鲜培养液或者用PBS冲洗的时候应该小心地添加新的培液进去, 以液体不冲打到贴壁的细胞为好。

6、

传代的时候, 只需要用0.05%胰蛋白酶-EDTA即可轻松把细胞消化下来, 不需要消化很长时间。有些同学反映293T

细胞容易结团不易被吹打开来。如果遇到这样的情况可以在加了胰蛋白酶温育一段时间后即拿1 ml 移液枪反复轻轻吹打, 直至肉眼看不到大的细胞块为止,

7、加适量的培养液混匀, 这时候在显微镜下观察, 可见大多数细胞都是单个的, 只有少量的2~3个细胞聚在一起。一般293T 细胞可以长在塑料的培养瓶底面上直到90% 融合, 再以1∶4~1∶8 的比率传代。合适的传代周期为2~3 天。

8、传代过程中, 消化的时间越短越好, 显微镜下观察到80%细胞脱落即可加培养液中止。

完成传代后放入培养箱前：

应该把培养瓶或培养皿沿X、Y轴方向水平移动几下, 防止细胞都聚在中间或者四周。冷冻293T 细胞的冻存液可以用95% 小牛血清加5% 二甲基亚砜, 复苏率很高。

293T细胞的生长状态直接关系到包装病毒和转染的效率, 应尽量选择传代次数少, 培养总时间短的细胞。从细胞形态上看, 相差显微镜下观察立体感强并且形态良好的细胞产病毒率或者转染效率都很高。

虽

然293T细胞的应用非常广泛, 几乎每个实验室都有一株自己的293T 细胞株, 但是经常有同学提出: 为什么在正常的培养条件下,

细胞却很难传代下去, 包装病毒效率很低, 对转染效率也不满意呢？ 事实上,

引起类似问题的元凶是一种生物界最小的原核细胞生物－支原体。支原体污染后, 它们不会使细胞死亡而是与细胞长期共存, 培养基不发生浑浊,

细胞无明显变化, 外观上给人以正常感觉, 但事实上细胞正在受到到多方面影响, 如引起细胞变形, 影响DNA 合成,

抑制细胞生长等。我们曾经收集到四株分别来自四个不同实验室的293T 细胞, 经检测均为支原体阳性,

令人惊讶的是这四株细胞都已经不是典型的293T 细胞形态, 每两株之间比较竟然形状各不相同,

很难相信这是同一种细胞！这些支原体阳性细胞普遍传代周期长, 显微镜下观察细胞碎片多, 长期支原体感染已经使这些细胞羸弱不堪, 胞内DNA

和蛋白质合成受到严重的影响。 因此, 有效地防治支原体污染, 杜绝交叉感染对提高实验效率,

稳定实验结果至关重要。我们的经验是把防治支原体污染作为细胞培养的一项日常工作, 除了对细胞培养设备环境的清洁外, 还需在器材消毒, 操作员培训,

严格把关新引入细胞株的质量等方面做大量细致的工作。