运用流式检测方法的有很多种检测仪器,其中纳米流式检测仪是相对于其他仪器检查中检测精度最高也最精确的一款仪器,对外秘体及细胞外囊泡、细菌病毒都有很好的检测效果。而这个仪器是厦门一家公司研发生产。
可以参考
Mattiasson, G. (2004). "Flow cytometric analysis of isolated liver mitochondria to detect changes relevant to cell death." Cytometry A 60(2): 145-154.
最后得到一个相对的半定量
但是问题是,你在分离的过程中会都是大量的线粒体,所以结果是不准的。而且,线粒体也是在不断融合,变化的,是一个动态过程。流式这个方法是无法得到准确数目的。
外泌体的提取主要包括以下几种方式。
一是超速离心法,这是目前外泌体提取最常用的方法 。此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足,电镜鉴定时发现外泌体聚集成块, 由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准,也有一些研究认为此种 方法得到的是微泡不是外泌体 。
二是过滤离心, 这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性 ,但同样存在纯度不足的问题。
三是密度梯度离心法, 用此种方法分离到 的外泌体纯度 高,但是前期准备工作繁杂,耗时,量少。
四是免疫磁珠法,这种方法可以保证外泌体形态 的完整,特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备,但是非中性pH 和非 生理性盐浓度会影响外泌体生物活性, 不便进行下一步的实验 。
五是PS亲和法,该方法将PS(磷脂酰丝氨酸)与磁珠结合,利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似,获得的外泌体形态完整,纯度最高。由于不使用变性剂,不影响外泌体的生物活性,外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9 nature杂志发表了该方法最新数据,表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。
六是色谱法,这种方法分离到的外泌体在 电镜下大小均 一, 但是需要特殊的设备 , 应用不广泛 。
观察纳米粒子需要特殊的手段。如果用流式观察,需要先用定制的微球珠吸附后,在通过抗体染色,可以观察到。
另外就是使用特殊的仪器,比如nanosight,可以直接观察到
您好!这边有纳米级的光学显微镜,可以移动,固定在特殊制作的平台上,通过拍照来检测玻璃的厚度,精度可以达到纳米级别。如果有兴趣可以私聊。
1.分析细胞表面标志
2.分析细胞内抗原物质
3.分析细胞受体
4.分析肿瘤细胞的DNA、RNA含量
5.分析免疫细胞的功能
关键词:纳米流式检测外泌体纯度