外泌体TET8（外泌体特异性标志物）

本文目录一览：

• 1、外泌体对护肤的作用是什么？
• 2、细胞外泌体是什么？
• 3、外泌体添加化妆品里是多少单位？
• 4、什么是外泌体保存液，外泌体保存液介绍？
• 5、什么是外泌体？

外泌体对护肤的作用是什么？

外泌体是细胞所分泌的直径为30~150nm的双层磷脂囊泡，其中含有多种miRNA、蛋白质和细胞调控因子；经研究发现，外泌体可以在细胞间进行通讯，传递生物信息和蛋白质，起到调节受体胞的作用。

通俗点来说，外泌体就像是带着由原细胞所发出的各种任务信息的“通信兵”，如“加快生产”~促进细胞新生和胶原合成；“降低成本”~降低炎症因子，修复细胞和组织老化损伤；“消除隐患”~降低皮肤基质降解，维持皮肤紧实弹性等各种信息，当外泌体将信息传递到受体细胞的时候，受体细胞就会接收这些信息并按照要求快速地行动起来，从而实现我们对受体细胞的调节和改善。

理论上任何种类的细胞都可以分泌外泌体；不过，目前在护肤领域展开研究的外泌体主要是来自人类多能诱导干细胞（IPSC）、骨髓间充质干细胞（MSC）和人真皮成纤维细胞（HDF）。

2019年8月，在美国北卡罗来纳大学所做的多项最新研究中证实：外泌体具有显著的皮肤抗老效果。

细胞外泌体是什么？

外泌体——是一类有细胞释放的细胞外囊泡。外泌体的特点见正文。

细胞外囊泡——简称EV，是由细胞释放的各种具有膜结构的囊泡结构统称，这些囊泡的直径可以从30、40nm到8、9um。细胞外囊泡有不同的亚群，而目前研究最火热的是外泌体这个亚群。

然而由于目前很难纯化到非常纯的外泌体亚群，人们纯化到的通常是直径小于200nm的囊泡，因此越来越多的人开始称之为sEV（即 small extracellular vesicle，小细胞外囊泡）。为了严谨，所以今天我们也以细胞外囊泡来称呼这些膜泡结构。本文中没有特殊说明的情况下，细胞外囊泡主要指外泌体和微囊泡。

今天主要介绍内容包括细胞外囊泡的研究意义、细胞外囊泡的分类、细胞外囊泡含有的成分、细胞培养上清的制备、细胞外囊泡的保存、细胞外囊泡的鉴定实验要求。所有内容都参考目前已发表的综述，并非hzangs杜撰。所以请新朋友们放心学习。

细胞外囊泡的研究意义

目前，细胞外囊泡的功能还没有完全阐明。已有的报道认为它们能够调节宿主-病原体的相互作用，参与传染性和炎性疾、神经疾病和癌症等很多种疾病的病理过程，同时在正常的生理过程中也发挥着介导细胞间通讯的重要功能，已有文章报道细胞外囊泡在发育中也发挥着重要作用。细胞外囊泡在临床医学中也有十分光明的应用前景，主要是因为它们含有丰富的生物标志物，可用于监测临床状态，治疗反应，疾病进展等，同时由于它们具有递送生物分子的功能，因此它们还有发展成临床药物递送载体的潜力。

细胞外囊泡的分类

细胞外囊泡—这个词是由国际细胞外囊泡学会（ISEV）创造的术语，根据细胞外囊泡的生物合成或释放途径可以对囊泡进行分类：外泌体（exosomes）直径为30-150nm，起源于内吞途径，其密度约为1.11-1.19g mL-1；微粒/微囊泡（microparticles/microvesicles）直接从质膜释放，直径约100-1000nm；凋亡小体（apoptotic body/bleb）直径约为50nm-2μm，由细胞凋亡产生；肿瘤小泡（large oncosomes）直径约1-10μm，由肿瘤细胞释放产生；以及其他各种EV亚群。由于不同EV亚群的大小以及它们的所包含的生物分子存在差异，因此现在已经有几个小组开始表征EV亚群的组成。最近的论文声称，基于一般表面蛋白质组学分析或个别EV群体的转录谱，对细胞外囊泡进行了成功的亚群分类。目前可以通过差速离心、过滤、免疫亲和、层析、流式细胞分选、密度梯度离心选取不同密度区域等多种手段大致分离不同的细胞外囊泡亚群，但是这些方法都不能完全纯化到特定的亚群，分离到的通常是富集了某一个亚群同时带有其他细胞外囊泡亚群。

细胞外囊泡含有的成分

细胞外囊泡的组成成分并不是随机的，每一个细胞外囊泡都会携带特定的分子信息。 实际上，这些纳米尺寸的细胞外囊泡能够携带蛋白质，脂质，核酸和糖等生物活性分子在细胞间传递信号，并且其包装的独特分子构成决定了要传递给受体细胞的细胞外信号的类型。有一个复杂的分选系统来决定那些分子能够进入细胞外囊泡。

细胞培养上清的制备

目前有两个策略来制备细胞培养上清用于提取细胞外囊泡。使用去除细胞外囊泡的胎牛血清（FBS）培养基培养细胞和使用不含FBS的培养基培养细胞（血清饥饿细胞）。但是目前一些高水平的文章报道使用的方法通常是前者。另外，有些文章开始关注去除细胞外囊泡的胎牛血清中游离RNA对实验结果的影响，但是目前并没有形成共识。如果需要先储存培养上清，一定量后再用于细胞外囊泡分离，那需要预先去除体系中的死细胞和细胞碎片。

细胞外囊泡的保存

Lőrincz等人曾对中性粒细胞来源的细胞外囊泡做了不同条件的储存，之后再去分析这些囊泡的特性，他们发现虽然细胞外囊泡样品中囊泡数量和形态没有明显变化，但即使是储存在-20或-80摄氏度情况下的细胞外囊泡也存在磷酯酰丝氨酸外翻明显增多的情况；但他们同时也发现，尿液来源的细胞外囊泡并没有这些变化。Kalra等人分离了来自结直肠癌细胞的细胞外囊泡，不同条件保存一定时间后进行PKH67染色跟踪细胞外囊泡的摄取，分析发现这些囊泡依旧可以被细胞摄取。就目前的情况，学者们并未就储存条件对细胞外囊泡是否有影响达成共识。因此建议大家实验时分离细胞外囊泡后尽快用于实验，尽量减少储存过程。

细胞外囊泡的鉴定及实验要求

根据国际细胞外囊泡协会于2014年发表的一个指导手册（MISEV），鉴定外泌体首先需要通过WB来鉴定细胞外囊泡的标志蛋白是否存在于样品中，通过电子显微镜来观察样品中细胞外囊泡的形态特征，通过NTA等手段来分析样品中细胞外囊泡的群体特征（粒子浓度、直径分布等）。

今天就先介绍到这里。细胞外囊泡领域作为生物学研究中的一个新兴领域越来越受到学者和生物公司的关注，也有越来越多的研究报道出现。但是我们也要清楚的认识到该领域的研究技术依旧不完善，对细胞外囊泡的认识依旧不充分，细胞外囊泡研究依旧处于一个起始阶段，要走的路还很长。

外泌体添加化妆品里是多少单位？

ml是体积单位，g是重量单位。

重量单位和体积单位的关系式为：质量=体积×密度。在不知道化妆品的密度的情况下，无法准确计算出质量。

以水的密度来看，1ml=1g，而大多液体护肤品以ml来计算，乳液、霜用g来计算，这是根据不同状态来区分的，所以化妆品会有ml和g两种单位。

9月21日下午，国家药监局于官网发布《化妆品标签管理办法（征求意见稿）》，消息甫出，业界哗然。其中争论的核心问题仍在于成分标注引发的功效宣称问题，这也是新《化妆品监督管理条例》（下称新《条例》）颁布带来的后遗症。

更多人认为，法规“意见稿”才是真正需要行业媒体表达声音的时候。《化妆品报》综合多位业内专家意见，帮助行业更好的理解法规最新动向。

1、微量添加等于概念性添加？

《办法》引发争议最多的是第12条关于微量成分标注的规定。

按照《办法》，“化妆品配方中存在含量不超过0.1%（w/w）的成分的，所有不超过0.1%（w/w）的成分应当以“其他微量成分”作为引导语引出另行进行标注，可不按照配方含量的降序列出。”

立刻就有人问，添加低于0.1%的成分就能起作用的化妆品怎么办？起到功效的成分还被列入了其他微量成分，这让品牌怎么宣传？

某原料公司的工程师告诉记者，从药品来讲，0.1%就能表达功效的成分是存在的，但在化妆品领域，对一般的美白、抗衰等功效而言，低于0.1%的含量就能起效的成分几乎没有。低于0.1%的添加还能发挥功效的，就只有防腐剂，它在低于0.1%的剂量下就可以起到防腐功效，但没有化妆品会去宣称自己的防腐功效。

对于业内盛传的 ppm级别（百万分之一）就能发挥化妆品功效的成分，该工程师告诉记者，他找不到这样的成分。但复配是个个例。他举例，化妆品的防晒或美白等功效通常需要通过多种防晒剂的组合添加方能奏效。以防晒为例，每个防晒剂都只有0.05%的含量，但这些成分复配起来，其总含量就超过了0.1%的可能性，但这些依然要被列在其他微量成分里。

除了复配的功效成分，被业界热议的主要是活性成分——在化妆品中，添加微量即能起到功效的成分主要是活性成分提取物。不过，在活性成分的添加含量之外，还有一个活性物的纯度问题。换言之，纯度和活性都会影响产品的功效。譬如许多日本的厂商将原料买回去后，都会进行二次处理，目的就是提纯，利用高纯度的活性成分提高产品功效。

有人认为，《办法》看起来更像是在鼓励企业购买低成本低纯度的活性成分。而那些添加了高纯度活性物的化妆品，却要被当做概念性化妆品加以打击。新《办法》似乎只强调了含量而未提及纯度，这一看法显然不够全面。实际上，今年8月推出的《化妆品注册与备案资料规范》（征求意见稿）和《化妆品新原料注册与备案资料规范》（征求意见稿），已经对化妆品原料和成分做出了详细的说明规定——要求化妆品企业在备案的时候，提交每个原料和成分的质量规格，也就是说，纯度问题在产品上市之前的注册和备案环节，就已经被“关照”到位。

对于一开始就奔着钻法规空子，利用低成本低纯度的成分，存心虚假宣传的品牌和企业来说，概念性添加的这扇门是严严实实地关上了，而对于真正想要认真做好品牌，拿真材实料严谨宣称的企业和品牌来说，新《办法》实际上是保护了他们。换言之，新《办法》对越规范的厂商越友好，尤其是本来就很注重法规不越界的品牌方。

更多人的理解是正面的——《办法》的主要作用是换种方式告诉大家不要乱来。拜尔斯道夫中国区企业事务及法务总经理雷开霆认为，为了一点点宣称，添加一点点的含量，其实难以保证功效，新的规定对于正规的企业是个好事情。“我想这也是监管部门从规范化妆品市场，让消费者拥有更多知情权、让品牌方真正做好产品的角度出发的吧。”

恩特科技总经理贾逸丹在接受记者采访时表示，“这需要行业上下共同对消费者进行教育，久而久之，消费者会明白，功效不取决于是否添加了某个成分，而是依据产品真实的功效验证。”贾逸丹认为，这将引导消费者去关注国家网站上公布的各个产品功效评价。

2、没有“偏向”进口品

反而增加了包材成本

有人说《办法》对进口品更友好，但也有人认为，《办法》实际上增加了进口品进入中国市场的成本。“标签的管理规定本身对国产和进口就是基本一致的，特别是中文体现的部分，不存在偏袒哪一方。如果一定要说的话，反而进口品的外文原包装也在一定程度上受到了监管，相当于是要按照中国的标准来了，要求是变严了，这在‘起草说明’ 里也有提到。”

比如，《办法》规定，直接接触内容物的产品包装容器上必须有中文名及保质期限的相关规定，也会对进口产品在原包装方面提出要求。众所周知，许多进口化妆品并未在接触内容物的产品包装上印有中文名和保质期限，特别是欧洲的产品，瓶身上很对只有产品批号，既没有中文标签，也没有保质期限。如果按照新《办法》，许多进口化妆品的包装都得更换，而这对企业来说无疑增加了很多成本。

此外，《办法》对产品原包装提出的要求，预计会引发一定的贸易关注，但考虑到《办法》只是对上位法《条例》相关内容的细化，且国外也有类似的管理规定，在继续坚持的同时，需要进一步做好沟通解释工作。

实际上，2014年《标签管理办法》对外征求意见时，引发最多贸易关注的部分就是借鉴药品的规定，必须专为中国设计中文包装。新《条例》在起草的过程中，对此条款进行了修订，规定可以加贴中文，但外文原包装的内容必须与加贴的中文标签一致，此做法较过去比相对宽松，但中文与外文一致，也强制了国外原包装必须符合中国的法规要求。也就是说，从《条例》到《办法》，法规对进口产品的监管也是同步趋严的，甚至可以说，对进口产品提出了更大的挑战。

3、冰点监管之下

化妆品行业或迎“跨境”潮

洗牌是必然的。“你去看新法规里面有多少规定，光是备案资料规范就有81页，我都还没看完，更不用说所谓的化妆品不良反应监管机制将跟接下来的续证挂钩，对质量负责人也有明文的专业及从业年资要求。”王楠预测，《办法》推出后，很多只会营销而不是真正专注做产品的品牌，尤其是现在一堆所谓互联网品牌，会在新一波法规实施后遇到很大的麻烦，甚至被洗牌。

《办法》意见稿推出的第二天，一家电子商务公司的则招聘启事引发了法规专业人士王楠（化名）的注意。在这个护肤产品经理的招聘上，明确要求产品经理要熟悉欧美系或日系产品开发动向。王楠说，这家企业对风向把控的很准——标准的电子商务公司要做跨境的节奏。

“跨境电商属于个人自用，民众自行负担风险，化妆品法规再严跟我（跨境电商）没有关系。”王楠说，未来一到两年内，大批的化妆品互联网公司将转向海外代工、加入跨境电商大军。

他还向记者透露，从2021年1月1日起，新的《化妆品监督管理条例》正式实施之际，各项配套法规或将逐条分批实施。

什么是外泌体保存液，外泌体保存液介绍？

外泌体(exosomes)是一种由活细胞分泌，直径在30-150nm，具有双层脂质膜结构的小囊泡，它在机体内广泛存在，如外周血、腹水、尿液、唾液、脑脊液等各种体液中，内含丰富的蛋白质、脂质以及核酸等生物活性成分。外泌体参与物质运输，还携带和传递重要的生物信息，在介导免疫抗原递呈、树突状细胞的活化、神经退行性疾病发生、肿瘤细胞抗原的转移及肿瘤诊断治疗中发挥重要作用，吸引了很多科研人员的关注，在深入研究外泌体前，外泌体的提取纯化、鉴定及合理保存是首要的步骤，也是一切后续实验的基础，只有高活性、高稳定性的外泌体才能确保后续实验的质量和可信度。

目前外泌体只能在2～8℃稳定保存3天，-20℃稳定保存1个月。长期保存需要-80℃低温，并且不能冻融，存储条件要求高，这些缺点影响了外泌体的深入研究。

由此，有效保持外泌体的完整性、生物活性和内含物稳定性的外泌体保存液仍有待开发。

什么是外泌体？

什么是外泌体

人到中年，最难以启齿的矛盾便是脸上越来越多的皱纹和内心与日俱增的

“抗老需求”之间的矛盾。为了今天的容颜不被明天改变，什么玻尿酸、水光针甚至是干细胞美容，我都勇于“尝鲜”。而作为美容界的后起之秀——“外泌体”，我更是不愿错过。毕竟它虽然是近两年兴起的美容模式，但其发展历史也已经有40多年了，而它的美容功效更是有口皆碑，比干细胞美容有过之而无不及，一时间，关于外泌体美容的宣传铺天盖地，可谓是风头无两，颇有“江湖大佬”的地位。但也正因为如此，我们更要科学严谨的对待外泌体美容，了解它的原理，才能更好的应用它。

外泌体，从字面上看，就是细胞向外分泌的物体。科学释义是：细胞所分泌的直径为30~150nm的双层磷脂囊泡，主要功效成分包括蛋白质类物质及micRNA类核酸物质。

外泌体的作用机理

外泌体最大的功能便是人体的“通信兵”，它能在细胞间传递物质，从而调控受体细胞的功能及生物学行为。通俗的说，外泌体就好像一辆“细胞货拉拉”，装了自家一堆有用的东西（里面有miRNA，mRNA和lncRNA等小分子核酸，还有细胞因子等蛋白），然后分泌出细胞外，再接着进入另一个细胞，进行“卸货搬家”。

希吉亚外泌体分离方法

外泌体天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中，希吉亚外泌体的分离方法有很多种，常用的有超速离心法、免疫磁珠法等。

Ø

超速离心法：超速离心法是大家最熟悉的一种分离方法，文献中应用最多且也是目前比较受到认可的方法。超速离心是先通过低速离心去除细胞和细胞凋亡碎片，再通过超高速去除大囊泡和沉淀外泌体。此方法耗时耗力，往往需要8-30个小时；且需要大量的起始材料和超速离心机；产量不高。

希吉亚外泌体美容机制

Ø

免疫磁珠法：利用外泌体表面特有的表面标记物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。该方法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但外泌体的生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验。

促进细胞再生。外泌体可以有效刺激受体细胞，释放细胞活力，促进其再生和新生。因而可以帮助淡化祛除斑点，促使肌肤光亮细腻。

修复受损细胞。外泌体外泌体可以加速I型胶原和III型胶原的基因表达，促进成纤维细胞增殖、胶原合成，从而让帮助修复受损的肌肤屏障。而且它可以提高受损部位的修复能力和愈合能力。

抑制炎症产生。外泌体可以诱导巨噬细胞向M2型极化，从而降低了巨噬细胞诱发炎症反应的能力，从而抑制炎症。我们肌肤的很多问题都与肌底炎症有关，而外泌体可以通过抑制炎症来让肌肤从内而外的健康起来。

干细胞疗法围绕使用完整细胞来替代丢失的组织。相反，外泌体是与细胞分离的囊泡。外泌体促进恢复青春活力的方式是利用外泌体中携带的有效成分来帮助其他细胞。

干细胞和外泌体的另一个主要区别是前者仅从身体的特定部位获得，例如：骨髓、血液、脂肪组织。而外泌体，可以从几乎所有类型的细胞中获得。胎盘中也含有大量的外泌体。

通过上述科普，大家对外泌体美容一定有了更全面的认识