外泌体转染是稳转还是顺转（外泌体转染是稳转还是顺转好）

本文目录一览：

• 1、如何高效率转染免疫T细胞？
• 2、做质粒转染293T细胞，提取质粒后用单酶切嘛？为啥
• 3、一个顺转一个稳转可以做对照吗

如何高效率转染免疫T细胞？

高效率转染免疫T细胞是大家关心的问题；

一、2020-2-19浙江大学附属第二医院乳腺外科,浙江大学附属第二医院浙江省疗法肿瘤微环境与免疫重点实验室；联合发表标题为Breast cancer-derived exosomes transmit lncRNA SNHG16 to induce CD73+γδ1 Treg cells（乳腺癌衍生的外泌体传递lncRNA SNHG16诱导CD73 +γδ1 Treg细胞）的文章到nature.com/sigtrans杂志，文章已被接受；

二、本研究使用中使用Invigentech（英克）公司INVI DNA RNA 转染试剂转染质粒DNA、siRNA到Vδ1 T 免疫T细胞里面；

三、本文中转染质粒DNA、siRNA，转染细胞数量信息如下：

A. 将全长2435 bp的序列克隆到pCR3.1载体中构建SNHG16过表达载体;

B. siRNA序列：SNHG16-homo-349，5′GCCUCUGCUGCUAAUUGUUTT-3'; SNHG16-homo-867， 5′-CCAAGGAGGGACUGUUUAATT-3′和SNHG16-homo-2004，5′-CCCAGUGUUGACUCACCAATT-3；

C. 转染细胞用量：6孔板里面1 × 106 cells/well；

四、发表文章部分内容如下：

Breast cancer-derived exosomes transmit lncRNA SNHG16 to induce CD73+γδ1 Treg cells

Plasmid construction and siRNA silencing A full-length 2435 bp sequence was cloned into the pCR3.1 vector to

construct the SNHG16 overexpression vector. The sequences of SNHG16-specifific siRNAs were as follows: SNHG16-homo-349, 5′GCCUCUGCUGCUAAUUGUUTT-3′; SNHG16-homo-867, 5′-CCAAGGAGGGACUGUUUAATT-3′ and SNHG16-homo-2004, 5′-CCCAGUGUUGACUCACCAATT-3′. The miR-16–5p mimics, inhibitor and negative

controls were purchased from GenePharma (SupplementaryTable S3).

To manipulate the expression of miR-16–5p in Vδ1 T cells, Vδ1T cells were sorted from peripheral blood and seeded into six-wellplates at 1 × 106 cells/well with 1 ml of medium supplementedwith 10% FBS, 10 μg/ml CD3, 10 μg/ml CD28 and 40 U/mL IL-2.Then, transfection reagent (INVI DNA RNA Transfection Reagent,Invigentech, USA) and miR-16–5p mimics/NC/inhibitor/inhibitor NC (20 μm) were incubated with the cells for 48 h, after which the cells were collected for further experiments.

做质粒转染293T细胞，提取质粒后用单酶切嘛？为啥

需要单酶切，使质粒线性化，由于线性化基因片段不能长期存于体内，利用后面稳定细胞系的筛选。

一个顺转一个稳转可以做对照吗

一个顺转一个稳转可以做对照。根据相关资料查询，瞬时转染与稳定转染都是将目的基因转染至特定哺乳动物细胞内，进而表达得到目的蛋白。不同的是瞬时转染的方式外源基因并没有转染到细胞的染色体上而是存在于游离的载体上，这样可以在短时间内获得基因的表达产物，但是随着细胞的不断分裂增殖外源基因最终会丢失，无法继续进行重组蛋白的生产。而利用细胞稳定转染则会将外源基因转染至细胞染色体上，目的基因不会随着细胞传代而消失，稳定转染的细胞株能够长期稳定的生产目的蛋白。瞬时转染表达和稳定转染表达最显著的区别就是在时间上。