你这下就惨了,长了霉菌细胞只能扔了,而且整个实验室和培养箱都要消毒啊。我们实验室液发生过类似事件,我把我们处理过程告诉你,希望对你有帮助:
首先消毒培养箱,如果你们有两个或以上培养箱就好办了,如果只有一个且还有很多其他细胞就麻烦点。只能暂时的放在超净台上。具体如下,中午将空调温度打到最高(也只有31度),超净台开紫外。下午早点来关紫外,将细胞转到超净台内,用75%酒精擦洗培养箱,再用无臭氧型可移动的紫外等照射半小时,然后将细胞放回即可(切记CO2瓶子阀门要关紧啊,不然气全跑光了)。
再消毒实验室,先把室内空调和消毒柜过滤网都拆下清洗,在锥形瓶内加点高锰酸钾,放在实验室地上,然后倒入甲醛,立马关门走人就可以了。
2天后再开门装好东西,和往常一样开始工作了。由于2天不能做事,个人细胞要先计划好,大家都可以休息两天。
1 霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。一般肉眼可见,较易倍发现,短期内培养液多不浑浊,倒置显微镜下可见细胞之间有纵横交错穿行的丝状、管状及树枝状菌丝,并悬浮漂荡在培养液中。很多菌丝在高倍镜下可见到有链状排列的菌株;念珠菌或酵母菌形态呈卵形,散在细胞周边和细胞之间生长。有时通过显微镜观察可能发现瓶底外面生长的菌丝,不要错当培养瓶内的污染。瓶外的污染物,需及时用乙醇棉球擦洗清除,以防其通过瓶口传入瓶内。
2 培养细胞的污染一旦明确,多数将无法救治。如果污染的细胞不是具有重要价值,一般发现污染后应尽快弃之,以防污染扩大影响其他细胞。
3 如为霉菌污染可以考虑采用制霉菌素25ug/ml或酮康唑10ug/ml对细胞进行处理。
防止细胞培养出现污染的方法如下:
1、从培养箱取放细胞前,用酒精清洁双手(或手套),尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前,用酒精消毒表面,并稍等至酒精挥发后再放入,以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
2、操作的时候防护服、口罩、手套缺一不可。操作前,准备好所有实验所需物品,以减少走动,物品需有序摆放在超净台触手可及的地方,同时空留足够操作空间。
3、操作时,试剂不用尽量及时盖上盖子,移至操作区外围,尽量不要从开口容器上经过。
4、使用移液枪时,将容器倾斜以便于移液,切勿将枪杆碰触瓶口及内壁。一旦发生倒吸情况,要及时用酒精棉球擦拭,以免液体残留导致细菌滋生。
5、冻存细胞时冻存管盖子需拧紧。复苏细胞时,从液氮罐取出冻存管,轻拧盖子,以确认盖子是否拧紧。
扩展资料:
1、细菌污染培养基的处理方法。可在培养液中加相应的抗生素处理。可以用四环素,庆大霉素,或者链霉素,前两者的工作浓度是50 μg/mL;链霉素的工作浓度是100 μg/mL。
2、霉菌污染培养基的处理方法。细胞一旦被霉菌污染,很难挽救,两性霉素B或制霉菌素都于事无补,建议果断舍弃该污染细胞,将环境彻底消毒。
参考资料:中国知网-防止细胞培养污染的技术措施
细胞污染分几种情况,处理方法不同。
细菌污染处理方法:
在培养基中加入抗生素处理,可以用四环素,庆大霉素,或者链霉素,前两者的工作浓度是50 μg/mL;链霉素的工作浓度是100 μg/mL。但是,细胞本身也有影响,状态大不如从前,所以,防范于未然,正确操作、严格执行无菌操作规范,定期清理消毒培养设施才是关键!
二、真菌污染
:真菌污染培养液清亮透明。
处理方法:赶紧扔掉,不要再想挽救,即使再珍贵。然后彻底消毒灭菌培养间,CO2孵箱,器皿和培养液。
三、霉菌污染
同真菌感染一致,因为培养液是清亮的,所以霉菌污染早期难以发现,等发现时往往已经为时过晚了。培养液中慢慢地出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物。
处理方法:建议果断舍弃该污染细胞,将环境彻底消毒,因为霉菌的顽固可能会导致下几批细胞都会污染,所以,采用酒精彻底底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新洁尔灭擦洗一遍,把水盘里加上饱和量的硫酸铜。千万不可大意!
四、支原体感染
:培养液变浑浊,支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是细胞状态变差、生长变慢,在显微镜下观察可能会有小黑点。
处理方法:
如果不是很珍贵的细胞的话,建议直接扔了吧。还是那句话,预防为主。
关键词:细胞被霉菌污染怎么办