玉米赤霉烯酮试剂盒属于科研类。
可定性、定量检测玉米等粮食作物、饲料等样本中的玉米赤霉烯酮残留量。
玉米赤霉烯酮试剂盒基于竞争性酶联免疫原理,抗原包被在酶标板孔内,分析过程中,样品和一抗、酶标二抗加入微孔中,如果样品中有毒素抗原,就可竞争与抗体结合,阻止抗体与包被的抗原结合,酶标二抗可与一抗结合从而与酶标板上包被的抗原结合。经酶催化底物发生反应颜色变化,颜色的深浅与毒素的浓度成反比。
一、概述
鸡蛋富含胆固醇,营养丰富,一个鸡蛋重约50克,含蛋白质6-7克,脂肪5-6克。鸡蛋蛋白质的氨基酸比例很适合人体生理需要、易为机体吸收,利用率高达98%以上,是人类经常食用一种动物源食品。
近年来随着人们生活水平的提高,蛋鸡行业的产能过剩,检测技术的不断进步和普及,食品安全和药物残留问题日渐显现,成为全球消费者和社会广泛关注的焦点。
兽药残留是指用药后蓄积或存留于畜禽机体或产品(如鸡蛋、奶品、肉品等)中原型药物或其代谢产物,包括与兽药有关的杂质的残留。
在动物源食品中较容易引起兽药残留量超标的兽药主要有抗生素类、磺胺类、呋喃类、抗寄生虫类和激素类药物。
二、鸡蛋中兽药残留来源
在蛋鸡集中化饲养过程中,兽药不仅能够用于防治疾病,部分还可作为饲料添加剂使用,促使机体生长或者产蛋率提高。
鸡蛋中的兽药残留是怎样形成的呢?
1.兽药本身存在质量问题,如含量超标、成分不符等;
2.违规使用禁用药、淘汰药、人用药或原料药;
3.用药不规范超剂量使用、长时间使用,不遵守休药期;改变给药途径、给药间隔和用药次数;
4.环境污染问题,如鸡食用了被污染的水源、饲料等,从而造成兽药在鸡体内蓄积。
三、鸡蛋中兽药残留现状及危害
氟苯尼考属于氯霉素类药物,恩诺沙星和氧氟沙星均属于氟喹诺酮类药物。
兽药残留对人的危害一般不表现为急性的毒性作用,主要表现为变态反应与过敏反应、细菌耐药性、“三致”作用和激素作用等多方面。
变态反应与过敏反应,主要是部分抗生素在用作治疗药或饲料药物添加剂时所引起的。
细菌耐药性,主要指动物反复接触某种抗生素后,体内敏感细菌受到了选择性抑制,反而使耐药菌株大量繁殖,再由动物性食品传播给人,使人在感染这类疾病后治疗无效或效果不佳。
其中“三致”作用指兽药残留可以造成致畸形胎儿、致基因突变和致癌症等。
四、鸡蛋中兽药残留快速检测方案
武汉华美生物坚持以捍卫食品安全为己任,研发、生产和销售酶联免疫、胶体金、理化法及免疫亲和柱等近三百种食品安全快速检测产品,针对鸡蛋中兽药残留的实验室批量样本筛查和现场批量样本筛查制定了相关的快速检测方案。
1、鸡蛋中兽药残留标准
2、实验室批量样本筛查-酶联免疫试剂盒系列
酶联免疫试剂盒-灵敏度高、检测时间短、操作方便、样品前处理简单、特异性强、检测成本低,配套酶标仪进行定量检测,适用于实验室批量样本筛查。
其中硝基呋喃四项样本前处理方法四合一,处理一个样本可以检测四个项目;
氟喹诺酮类试剂盒与多种氟喹诺酮类药物存在交叉反应,且交叉反应率比较均一。
酶标仪-本仪器基于比色法,与酶联免疫试剂盒配套使用,可对酶联免疫检测实验结果进行读取和分析。
可视化酶标板图直观图形化界面设计,便捷的样本信息录入功能,独有的定制软件,快速分析检测结果。
3、现场批量样本筛查-胶体金快速检测卡系列
操作方便,适合非专业人员,且前处理方法较为简单,只需配备简单设备即可完成样本前处理,适用于现场检测。
上海科艾博生物(COIBO)科技
从大的方面说ELISA属于酶免疫技术。 免疫酶技术是将酶作为标记物,标记抗体或抗原后,与相应的抗原或抗体发生反应,通过标记酶相应底物的颜色反应作抗原抗体的定性和定量的检测依据。
目前应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验(ELISA),如果要分类的话,它属于异相固相酶免疫技术。所谓异相是指在检测时不需要将酶标记抗原抗体和游离抗原抗体分开,所谓固相就是指的ELISA的96孔板固相载体了。看下面均相酶免疫测定的原理图:
ELISA的主要原理很简单,有这么三个, 1、包被 抗原或者抗体能以物理性吸附于固相载体表面,可能原理是蛋白质和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原抗体反应等免疫活性; 2、标记 抗原或者抗体可通过共价键与酶连接成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特点; 3、显色 酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或者抗体结合后,也被固定在固相载体上,加入酶的底物之后可出现显色反应,根据反应的颜色深浅可计算抗原或者抗体的相对含量。ELISA 实验设计根据检测对象的不同,我分别给童鞋们介绍抗原的检测方法设计和抗体的检测方法设计。抗原的检测设计 1、双抗夹心法 针对至少2个抗原决定簇的多价抗原。首先介绍一下抗原决定簇,抗原决定簇就是决定抗原性的特殊化学基团,也叫抗原表位,理论上一个抗原决定簇能诱导产生一种单克隆抗体(可能有童鞋又要问单克隆抗体是神马东东了,以后介绍啊)。由6-12氨基酸或碳水基团组成,它可以是由连续序列(线性表位)组成或由不连续的蛋白质三维结构(构象表位)组成。临床上具有2个抗原决定簇的多价抗原有很多,比较常见有HBsAg、AFP、HCG等大分子抗原。检测步骤也简单,就是包被、洗涤、加样、洗涤、加样、洗涤、显色。具体说来是先将纯化的相应抗体包被在固相载体上,再加入待测样品,若其中含有待测抗原就会与固相抗体结合,洗掉杂质后,再加入酶标记的检测抗体进行反应,洗掉多于的酶标抗体后,加入底物显色,显色与否以及颜色的深浅就代表了待测抗原是否存在以及相对含量了,简单吧。
对于双抗夹心法检测大分子抗原要注意几点,1.固相抗体和酶标检测抗体一定是分别针对待测抗原的两个不同抗原决定簇,不然两个抗体就会为争同一个决定簇而打架,会出现假阴性的不良结果;2.如果检测的样本是血清,就要注意风湿病患者体内内风湿因子RF这种奇葩异种抗体的存在,它能够神奇地结合固相抗体和检测抗体,造成假阳性的不良结果;3.包被的固相抗体含量一定是高于样品中的抗原含量,不然检测到的含量会比实际含量低;4.如果有童鞋想高端省事一些,将待测样品与酶标检测抗体同时加入固相载体,在酶标检测抗体高于样品中的待测抗原的情况下,会出现假阴性结果,这种现象书本叫钩状效应。 2、竞争法 针对小分子抗原。这种方法也可以用于大分子抗原,只是相对双抗夹心法这种强悍的策略,竞争法完全没有优势,所以竞争法只在检测小分子这个边缘地带发挥余热了。临床上主要用于T3、T4、孕酮等激素以及药物等。检测步骤与双抗夹心法更简单,包被、洗涤、加样、洗涤、显色,少了一步加样的过程,但是设计上复杂一些,首先将纯化的相应抗体包被在固相载体上,然后每组样本需要分两组,一组同时加入事先混匀好的酶标检测抗原和样本的混合物,一组只加入酶标记抗原,两组颜色只差便是待测抗原的含量,有点晕啊。
对于竞争法也需要注意一点,酶标记抗原和待测样本一定要事先混匀好,然后同时加入固相载体,不然会造成不公平竞争,检测出现偏差;抗体的检测设计 就方法来说,有间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法四种设计。 1、 间接法,这个是检测抗体最常用也最简单的方法。操作步骤与双抗夹心一样,只是包被是纯化的相应抗原而不是抗体了,加入样品后洗涤,再加入的酶标记抗抗体,然后显色,颜色深浅与样品中待测抗体的浓度正相关。这个间接法的原理和步骤与双抗夹心一样一样的,为了区分就把包被抗原检测抗体叫做间接法了,以此类推,之前的双抗夹心法也可以叫做直接法,命名其实就是这么回事,规则多了就容易让人糊涂。间接法也有一些自己的特点,1.酶标记抗抗体可选择性检测抗体的亚型,可用于鉴别感染时期,如果是IgM那么提示感染早期;2.酶标抗抗体检测抗体特异性不高,容易产生假阳性,如果封闭不完全,可出现全板阳性,挺吓人的。临床上常用该方法检测抗HCV抗体、抗HEV抗体、抗CMV抗体、抗HSV抗体、抗沙眼衣原体抗体等等。
2、 双抗原夹心法,这个完全是山寨双抗夹心法的。原理和步骤也与双抗夹心一样一样的,与间接法相比,具有优越的灵敏度和特异性,但不是很常用,因为就目前的技术条件,想得到能用于ELISA检测的纯化抗原还是有一定的难度。临床上常用于检测HIV抗体初筛,TP抗体和抗HBs抗体等,这些检测对特异性和灵敏度,准确性都要求特别高。
3、 竞争法,和检测抗原设计的竞争法完全一致,临床上用的不多,我仔细总结了一下两个很具有代表性的,也各具特点。1、抗HBc抗体,检测方法与抗原相同,包被抗原之后,分两组,一组加入预先混匀的酶标抗体和待测样品,一组只加入酶标抗体,两组的显色之差可代表待测抗体的相对含量,需注意的是待测抗体与酶标抗体是同一物质;2、抗HBe抗体检测,方法与抗原竞争法设计稍有区别,包被的抗HBe抗体后,检测也分两组,一组先加入酶标HBeAg再立即加入待测样品,一组只加酶标HBeAg,两组显色之差代表待测抗体的相对含量,这种设计中包被抗体和待测抗体是同一物质。值得注意的是混合组不是事先混匀再加入,而是先加入待测抗体后再加入酶标抗原。所有的这些复杂的注意事项确实很容易把人搞晕,但是童鞋们只需要记住一条,竞争很残酷,我们就要想尽一切办法保证竞争的公平性,这样就不会错。
4、 捕获法,这种方法比较少用,由于具有识别抗体类型的优点,仅用于需要早期诊断的急性感染或者具有爆发性感染的疾病,如HAV-IgM、HBc-IgM、ToRCH等等。原理还是逃不脱经典的双抗夹心,具体方法是先包被能识别抗体类别的抗抗体,洗涤后加样品,再洗涤,加酶标记抗原,洗涤后显色,这些步骤闭上眼睛都能写出来。
最后说两句,与抗原检测不同,抗体检测的设计不是根据抗体的结构特点了,这么多种设计方法,童鞋们用的时候就会选择障碍了,掌握2个原则,1.实验要求,如果需要特异性和准确性特别高,那肯定是双抗原夹心法,要求马马虎虎,那就间接法,如果要明确抗体类型,最好的选择就是捕获法了;2.实验成本,与纯化抗体不一样,有时候想要获得纯化的抗原是非常困难的,更别说两种不同的纯化抗原了,所以双抗原夹心法临床上用的并不多。ABS-ELISA顺便说一下ABS-ELISA设计,其实是和上面说的一样的,通过亲和素-生物素系统(ABS)方法显色反应,增加检测灵敏度而已,但是增加操作步骤与实验成本,而且现在单克隆抗体的技术越见成熟,抗体特异性和亲和力大大提高,灵敏度已经不是问题,所以这些次等装备已经不常用。
结果判定最后和童鞋说说ELISA结果判定,分定性和定量两种。对于定性试验,参比阴、阳性对照的吸光度,以P/N或者S/CO比值形式报告。1. P/N比值是指(待测样本-空白对照)/(阴性样本-空白对照),一般以P/N≥2.1判为阳性,或许求知欲旺盛的童鞋会问,那么竞争法用P/N比值怎么判,呵呵,这里先不说,卖个乖,你可以百度或者私信我啊;2. S/CO比值,S是待测样本吸光度值,CO为CUT-OFF值,通常取值阴性对照平均值的2.1倍。S/CO比值≥1为阳性,竞争法S/CO比值≤1为阳性。定量检测没有什么可说的,老老实实做标准曲线,既锻炼实验操作能力,又可作为实验内部参照。
记得有这么个规定,定性检测不能目测判断,要凭借酶标仪检测,定量要在每次实验都得与待测样本相同实验条件下绘制标准曲线,有一难度,但是为了对实验负责,你就从了吧。
快速检测卡
例如啶虫脒胶体金快速检测卡就是应用了竞争抑制免疫层析的原理,样本中的啶虫脒在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合,抑制了抗体和NC膜检测线上啶虫脒-BSA偶联物的结合。如果样本中啶虫脒含量大于或等于0.01mg/kg,检测线(T)无红色条带出现,结果为阳性;反之,检测线(T)显示红色条带,结果为阴性。
2.酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒法
酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒法:抗原抗体之间 发生特异结合反应,根据显色深浅来定量分析。
食品安全快速检测的主要方法有哪些
3.便携式仪器法
便携式仪器法:如便携式智能食品安全快速检测仪农药残留快速检测仪(分光光度计)、ATP荧光检测仪、酸度计、肉类水分测定仪、 电导仪、温湿度计、中心温度计、食用油极性测定仪、辐照度计等。
食品安全快速检测的主要方法有哪些?广州瑞森生物科技股份有限公司小编就介绍到这里了。其实除了以上的检测方法之外,还有其它形式的快速检测方法。食品安全快速检测是食品安全监管人员的有利工具,采用现场快速检测能够及时发现可疑问题,采取相应措施,对保障食品安全有着重要的意义。
关键词:免疫试剂盒