答:细胞融合的方法有:1、物理法:是利用离心、振动、电刺激等促进细胞融合。2、化学的方法:用聚乙二醇等试剂作为诱导融合。3、对于动物细胞,还用灭活的病毒作诱导剂。
诱导细胞融合的方法有三种:生物方法(病毒)、化学方法(聚乙二醇peg)、物理方法(离心,震动,电刺激)某些病毒:如仙台病毒、副流感病毒,可介导病毒同宿主细胞融合,也可用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合
灭活的仙台病毒和聚乙二醇,要说化学试济应该主要就是聚乙二醇。
动物细胞整合的诱导有三种方法:物理方法(如:电刺激,振动等);化学方(如:聚乙二醇);生物方法(如:灭活的仙台病毒)
而植物细胞杂交一般不用生物的方法。
是三种方法。离心、振动是物理方法,除此之外还有聚乙二醇法,仙台病毒法融合法。
同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并,称自发融合;异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合,称诱发融合。
仙台病毒法融合
①两种细胞在一起培养,加入病毒,在4℃条件下病毒附着在细胞
膜上。并使两细胞相互凝聚;
②在37℃中,病毒与细胞膜发生反应,细胞膜受到破环,此时需
要Ca2+和Mg2+,最适PH为8.0一8.2;
②细胞膜连接部穿通,周边连接部修复,此时需Ca2+和ATP;
④融合成巨大细胞,仍需ATP。
聚乙二醇(PEG)法
聚乙二醇(PEG)结构为:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分子量大于200小于6000者均可用作细胞融合剂。PEG经高压灭菌后,与温热的Engle氏液混合。一般选用分子量为4,000,常用浓度为50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3调整),分子量小的PEG,融合效应差,又有毒性,分子量过大,则粘性太大,不易操作。
电融合法
在直流电脉冲的诱导下,细胞膜表面的氧化还原电位发生改变,使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂,进而质膜开始连接,直到闭和成完整的膜,形成融合体。
优点:融合率高、重复性强、对细胞伤害小;
装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像观察融合过程;
免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。
离心振动
物理方法之一,使用离心机等机器实现细胞之间的融合。
可以
诱导细胞融合的方法有三种:生物方法(病毒)、化学方法(聚乙二醇PEG)、物理方法(离心,震荡,电刺激)。某些病毒如:仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白(fusion protein),可介导病毒同宿主细胞融合,也可介导细胞与细胞的融合,因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变,去掉作用因素之后,质膜恢复原有的有序结构,在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。
首发命中~~望采纳
关键词:离心法融合细胞