骨髓间充质干细胞提取提纯（骨髓间充质干细胞的提取）

我们将包括所有关于骨髓间充质干细胞提取提纯和骨髓间充质干细胞的提取的知识，以便更好地理解两者之间的差异和联系。

骨髓间充质干细胞如何取材

自然来源于骨髓，须充成体骨髓中提取间充质干细胞；一般不提倡从骨髓中提取间充质干细胞。

干细胞是从自己身上提取的吗？

理论上来讲，人体的任何组织都含有干细胞。为什么这么说呢？因为人体内所有组织中的细胞发生损伤或衰老，进而需要替换时，都会由组织中的干细胞分化出成熟的功能细胞，以替换损伤或衰老的细胞，修复人体组织。

可以说，人体就是由细胞构成的一个复杂社会，社会需要不断更新，维持生机和活力，干细胞就是细胞社会更新的源泉。科学家从多种组织提取成功提取了干细胞。

1、骨髓

骨髓中的造血干细胞发挥了治疗作用。需要注意的是，骨髓中包含两种类型的干细胞。一种是造血干细胞，用于白血病的治疗。

骨髓造血干细胞

一种是间充质干细胞，起初用于治疗造血干细胞移植后发生的移植物抗宿主病，后来发现间充质干细胞是多能干细胞，能够分化为肝脏、大脑、上皮、心肌等多系统的功能细胞，对冠心病、糖尿病、神经损伤、自身免疫性疾病等慢性病都有治疗作用。

2、外周血

3、脂肪

之前，人们很难想象，白白的脂肪中也含有干细胞。

欧洲市场首个获得集中上市 许可（MA）批准的异体脂肪干细胞产品

4、经血

大家可能想不到，“大姨妈”也能被废物利用，从中提取干细胞。经血中能提取的干细胞类型主要是间充质干细胞。

5胎盘和脐带血 脐带和胎盘统称为围产期组织。孩子出生时通常被丢弃的脐带和胎盘含有非常丰富的干细胞。

胎盘体积大，是十月怀胎期间胎儿发育的基地，含有更加丰富的干细胞。韩忠朝院士团队全球最早从胎盘中分离4中类型的干细胞: 亚全能干细胞、间充质干细胞、母亲干细胞、造血干细胞。这些类型的干细胞分别在抗衰老、慢性病、母亲产后疾病、白血病等具有广阔的应用前景。

最后，还有一种干细胞类型，胚胎干细胞，由于是通过非正常的流产途径获取，而且各国都禁止直接用于临床治疗，在此不再介绍。

从骨髓、外周血和脂肪中提取干细胞，均必须进行有创性操作，需要从身体中抽吸骨髓、外周血和脂肪，可能会对人体造成伤害，而且数量有限。从经血和尿液中提取干细胞，数量更加有限，而且很容易发生细菌污染。

从脐带和胎盘，尤其是胎盘，提取干细胞，不仅数量巨大，而且活性高、易于标准化制备、不易发生污染，是目前最理想的干细胞来源。

求助人脐带间充质干细胞提取方法

方法:

无菌条件下截取流产胎儿双侧四肢骨,PBS冲洗髓腔,离心去脂肪及上清液,L-DMEM重悬细胞,沿管壁缓慢滴加至底部有等量1.073 g/mL Percoll分离液的离心管中,离心后吸取中间界面白膜层,加入含体积分数为10%的胎牛血清、青霉素钠、链霉素的L-DMEM完全培养基,接种后置于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度孵箱内培养.48 h后换液,去除未贴壁细胞,以后每2d换液一次.待细胞达到80%～90%融合时,胰酶-EDTA消化传代.

主要观察指标:

倒置显微镜及Giemsa染色观察细胞形态;透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞技术检测其表面标记物;碱性磷酸酶染色检测成骨分化能力;Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色检测成软骨分化能力.结果:原代及传代培养的胎儿骨髓间充质干细胞呈梭形外观,具有较强的增殖能力.胞体较小,细胞核/浆比例大,胞核呈圆形或椭圆形,胞浆少,染色质较疏松,表现出早期细胞的特点,传至第20代细胞超微结构仍无明显改变.细胞表面抗原CD29,CD44,CD105呈阳性表达,CD34,CD45呈阴性表达.骨髓间充质干细胞诱导分化后,碱性磷酸酶染色及Ⅱ型胶原均呈阳性.

结论:

利用密度梯度离心+贴壁筛选法可成功分离培养胎儿骨髓间充质干细胞,所获细胞能够向成骨细胞及软骨细胞分化,该方法为体外培养扩增胎儿骨髓间充质干细胞的简单、稳定、高效的手段.

间充质干细胞和肿瘤关系

间充质干细胞和肿瘤关系

间充质干细胞最早在骨髓中发现，随后还发现存在于人体发生、发育过程的许多种组织中。目前, 我们能够从骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺等组织以及羊水、脐带血中分离和制备间充质干细胞，用得最多的是骨髓来源的间充质干细胞。但骨髓来源的间充质干细胞存在以下问题：随着年龄的老化，干细胞数目显著降低、增殖分化能力大幅度衰退；制备过程不容易质控；移植给异体可能引起免疫反应；取材时对患者有损伤，患者有骨髓疾病时不能采集，即使是健康供者，亦不能抽取太多的骨髓。这都限制了骨髓间充质干细胞临床应用，使得寻找骨髓以外其他可替代的间充质干细胞来源成为一个重要的问题。

2006年，我国在胎盘和脐带组织中分离出间充质干细胞，这种组织来源的间充质干细胞不仅保持了间充质干细胞的生物学特性，而且还具备如下优点：①胎盘和脐带中的干/祖细胞更原始，有更强的增殖分化能力。②免疫细胞较为幼稚，功能活性低，不会触发免疫反应及引起移植物抗宿主病。③干细胞易于分离，纯度高，无肿瘤细胞污染。④扩增时培养体系能统一，便于质控。⑤可制成种子细胞冷冻，多次使用，冷冻后细胞损失小。⑥潜伏性病毒和病原微生物的感染及传播几率比较低。⑦采集时对产妇及新生儿无任何危害及损伤。⑧采集方便，易于保存和运输，伦理学争议少。这种胎盘和脐带来源的间充质干细胞有可能成为骨髓间充质干细胞的理想替代物，并具有更大的应用潜能。

国内间充质干细胞的研究在2015年有了新的突破，北大未名研究及应用的间充质干细胞全器官逆龄抗衰(第四代)价格不到市场价的1/10 。国人可以享受低价高效的顶尖技术，达到全系抗衰、器官修复、器官减龄的目的。

鉴于间充质干细胞具有多向分化潜能、能支持造血和促进造血干细胞植入、调节免疫以及分离培养操作简便等特点，正日益受到人们的关注。随着间充质干细胞及其相关技术的日益成熟，临床研究已经在许多国家开展。作为种子细胞, 临床上主要用于治疗机体无法自然修复的组织细胞和器官损伤的多种难治性疾病；作为免疫调节细胞，治疗免疫排斥和自身免疫性疾病。

最初的临床研究是1995年由Lazarus等人进行的，他们收集缓解期血液肿瘤患者的自体MSC，在体外扩增培养4~7周，然后再静脉注射入患者体内，患者被分为3组，分别给予不同剂量的MSC，注射后没有观察到毒副作用，提示MSC用于移植治疗安全可靠。随后自体MSC的临床报道逐渐增多，病种涉及放疗及化疗后造血重建、移植物抗宿主病（GVHD）、心脏系统疾病等，在这些报道中均证明临床经静脉输注安全可靠。

然而自体间充质干细胞的应用过程中逐渐暴露了不便之处：例如扩增能力个体差异很大；潜在的肿瘤细胞污染风险；培养需要一定的时间，不能及时适应病情的需要等。这些制约了自体间充质干细胞的使用。间充质干细胞给未来的再生医学带来了新希望, 对间充质干细胞更深入的研究和临床应用必将在不远的将来造福人类。其中，胎盘和脐带来源的间充质干细胞具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低、取材方便、无道德伦理问题的限制、易于工业化制备等特征，有可能成为最具临床应用前景的多能干细胞。

刚关于干细胞提取，你想知道的都在这

干细胞在医学界被誉为“第三医疗手段”，是区别于传统手术治疗和药物治疗的革命性医疗手段，在治疗各种难治性疾病、罕见病方面具有自己独特的优势。

随着年龄的增长，人体免疫力会逐步下降，此时身体开始出现各种疾病，体内细胞的活性以及数量也会相应减少，身体器官以及机能的修复再生能力下降，此时给身体补充干细胞，组织器官就能得到及时修复，疾病也会很快痊愈。

干细胞是一类具有多项分化潜能和自我复制能力的未分化起源细胞，也被医学界称为“万用细胞”。生老病死的各个阶段都是由细胞所决定的，当体内的细胞数量与质量逐步降低，无法及时有效的替换补充体内衰老病变的功能细胞时，疾病与衰老就会到来。

而干细胞可以利用自身的分化作用修复受损的组织器官，能够分化为身体所需要的组织器官细胞来补充损失的细胞，代替那些衰老受伤的细胞恢复受损组织器官的功能。

干细胞能再生各种人体组织，可以分化成牙周组织、神经等组织细胞，将来还可以用于器官组织的再生，并且还有抗衰老的功效，补充干细胞可以有效去除皱纹，恢复肌肤光泽弹性，有着显著的美容护肤效果。

有哪几种干细胞值得我们提取储存？它们又分别有什么区别和作用？

一、脐带干细胞

脐带干细胞已经成为了具有共识性的，安全有效的间充质干细胞样本来源。脐带干细胞一般指脐带间充质干细胞。

脐带间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它的增殖能力比较强，能分化成许多种组织细胞，做异基因移植的时候，也很少出现排斥的反应，能攻克许多难治性慢性病，还可以修复衰老的组织器官，抵抗人体衰老。

提取并储存脐带干细胞相当于给新生儿及其父母上了一份保险。

二、骨髓、脂肪干细胞

如果在出生时没有储存脐带干细胞，成年后再想储存自己的干细胞就要抽取骨髓干细胞或脂肪干细胞，这两种干细胞是成年人干细胞的最佳来源，其中脂肪干细胞的活性要强于骨髓干细胞。

脂肪干细胞提取过程容易，只需要通过微创在腹部提取20cc的脂肪。先将样本放在–80 °C冰箱过夜，第二天再转移到液氮进行长期储存。脂肪干细胞在体外扩增技术成熟，可以保管30年左右。

干细胞在生命科学、新药试验和疾病研究这三大生物医药领域都有着广泛的运用，不仅在疑难杂症上初露锋芒，也在常见病、医美方面崭露头角。近年来，我国干细胞产业发展迅猛，相信随着生物医学的不断发展

骨髓间充质干细胞分离的方法有几种

骨髓基质细胞是存在于骨髓中的一类多能干细胞，具有分化成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和其他几种结缔组织细胞（如腱细胞）。亦可转分化成心肌细胞和骨骼肌细胞。骨髓间充质干细胞现已被归为结缔组织成体干细胞。事实上，骨髓基质细胞中的间充质干细胞数量是很少的，约占细胞总数的10万分之一，其定向分化也不均一，现在越来越多的研究揭示骨髓间充质干细胞及其初步分化的祖细胞或称前体细胞(precusor,

progenitor

cells)具有一些特殊的表面蛋白特征；此外，干细胞具有多向分化及自我更新能力，其细胞复制分裂方式是不对称分裂，这明显不同于普通的细胞。通过贴壁法或percoll等细胞分离介质只能获得混合的骨髓基质细胞，只有应用免疫磁珠、流式细胞仪等将其进一步分离纯化后，才能称为骨髓间质干细胞。（河南省干细胞库）

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