冻存干细胞回输流程（回输干细胞的流程）

造血干细胞移植病人回输骨髓血时如何处理

（1)使用一根普通输液器和一根带有过滤网的打干细胞多长时间见效输血器。 (2) 骨髓血输前需倒挂30分钟，使骨髓血中的外泌体针脂肪颗粒上浮。 (3) 输每袋骨髓时不要将上浮的脂肪颗粒输入病人体内，一定要废弃掉，以免造成脂肪 检塞。

   (4) 输注的速度由快到慢，血型相合的骨髓血回输速度可达到每小时300ml，血型不相 合的骨髓血回输速度可根据病人情况，最快速度可达到每小时250ml。   (5) 密切观察病人有无胸闷、憋气、寒战等症状，及时发现及时汇报医生并遵医嘱及时 处理。

   (6) 回输过程中专人看护，严密监测管路通畅情况，有无漏血、堵塞等情况。 (7) 输注完毕后直接用灭菌生理盐水脉冲式冲中心静脉，插管后封闭中心静脉导管。

请问一下存储干细胞的流程是什么？

采血:需要采集客户约150ml-200ml外周血。

2.

生产:采集好的外周血经离心后收集有核细胞,用造血干细胞专用培养基培养,使有核细胞逆转成为造血干细胞。

3.

检测:采集的外周血,干细胞生产的第3天和第6天均做细菌检测、细胞计数和流式细胞,确保干细胞生产过程中不被污染,...

4.

储存:收集生产到第六天的干细胞,分装到2ml的冻存管中,程序性降温到零下80℃后,...细胞存储是讲人体内健康、活性强大的细胞低温储存起来，保持其最大活性，待将来有治病、保健抗衰、改善亚健康的需求时，则可以从细胞存储库中将健康有活力的细胞取出，重新回输到人体，使身体得到及时有效的治疗。

干细胞是形成人体各组织器官的原始细胞。它拥有再生和分化的能力，可增殖为原来相同的细胞，也可分化为其他大芋头和小芋头的区别功能的细胞。因此，干细胞可以用来修补受损的组织或器官，甚至还可以构建出完整的器官。应用干细胞可治疗多种疾病，包括血液免疫系统疾病、神经系统疾病、心脑血管疾病、肿瘤等，是再生医学的重要资源基础。

你们做过干细胞疗法吗？需要怎么做？求详细流程

干细胞的作用是非常多的，比如抗衰，提升免疫力，慢性疾病的治疗和预防等等...日本国外有些国家已经应用非常的广泛了，举例干细胞抗衰的流程：

第一步——自体干细胞提取

从自体腹部皮下脂肪中获取（约5粒米粒大小的脂肪组织），同时采集一小部分自体血液，用于自体血清制备，以培养干细胞。

第二步——干细胞制备

提取后，在独立的细胞制备实验室进行分离和培养，提取脂肪间充质干细胞，进行细胞扩增，等待细胞制备。

第三步—干细胞静脉回输

将由自体血清培养出的自体干细胞，通过静脉回输的方式注入体内，经血液循环抵达身体各大器官组织进行修复，

大约2-3个月的时间完成修复和新生细胞。

干细胞移植过程是怎样的？

首先让骨髓中的造血干细胞大量释放到血液中去，这个过程称为“动员”。然后，通过血细胞分离机分离获得大量造血干细胞用于移植，这种方法称为“外周血造血干细胞移植”。这样现在捐赠骨髓已不再抽取骨髓，而只是“献血”了。而且，由于技术的进步，现在运用造血干细胞“动员”技术，只需采集分离约50至200毫升外周血即可得到足够数量的造血干细胞。采集足够数量的造血干细胞后，血液可回输到捐献者体内。

通过干细胞移植过程可以治疗多种疾病，而且效果明显。造血干细胞移植可以治疗多种血液病、实体瘤、免疫缺陷病和重度急性放射病，这已被很多人所熟悉。据介绍，造血干细胞移植目前广泛应用于恶性血液病、非恶性难治性血液病、遗传性疾病和某些实体瘤治疗，并获得了较好的疗效。1990年后这种治疗手段迅速发展，全世界1997年移植例数达到4.7万例以上，自1995年开始，自体造血干细胞移植例数超过异基因造血干细胞移植，占总数的60%以上。同时移植种类逐渐增多，提高了临床疗效！

干细胞的移植不会对于贡献者造成什么身体的影响！干细胞移植成为现代医学中间不可或缺的技术手段！

细胞冻存的操作步骤是什么？

1、配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；

2、取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。

3、去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；

4、离心1000rpm，5min；

5、去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；

6、细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；

7、在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；

8、冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

注意事项

1、从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞用于冻存，最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液；

2、将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤；

3、冻存和复苏最好用新配制的培养液。

细胞冻存的操作步骤

细胞冻存

1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷；

2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞（尽可能温和）；

3.再次用完全培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.

4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.

5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐）最好；或者可以在4℃,2h；然后转到-20℃,2h；-80℃,2h；放入液氮罐.

这是我实验中用的protocol,