植物钙离子荧光探针（植物钙离子荧光探针图片）

本文目录一览：

• 1、测钙离子时为什么380激发的荧光强度比340高
• 2、钙离子荧光探针的产品原理
• 3、钙离子荧光探针的应用详解

测钙离子时为什么380激发的荧光强度比340高

有钙离子敏感的荧光探针，随着钙离子浓度的变化，荧光强度也变化。不过这种方法一般都是用来检测钙离子浓度的变化，而不是检测浓度的。

钙离子荧光探针的产品原理

主要结合dsDNA；结合小沟的AT。DAPI也结合RNA，但其发射峰波长（500nm）要长于DAPI/dsDNA（460nm）。

DAPI dilactate更水溶。在用于组织染色、未固定细胞和组织染色时，下述方法可加以修改。

保存：

10mg/单位，室温避光保存，小瓶内至少一年。制stock液，溶解100uM （DAPI dihydrochloride二盐酸化物分子量为350.3；DAPI dilactate分子量为457.5）DAPI于去离子水中或DMF(二甲基甲酰胺)，4℃避光可保存6个月。

DAPI是诱变剂，水溶液可通过活性炭去除，要安全处理。

染色：

在所有染色完成后进行复染，不需要另外的固定和通透处理。

钙离子荧光探针的应用详解

吸收波长/发射波长：506nm /526nm(低/高钙)

保存与使用：粉状的FLUO-3AM应保存于-20度以上。建议使用DMSO作为溶媒。在溶解前，FLUO-3AM和DMSO均须放置至室温。溶解过程可能会比较慢。用无水的DMSO溶解的FLUO-3AM长期保存，应严格密封，并保存于-20度。使用前，将保存液放置至室温后再打开。可避免AM探针在长期的保存过程中水解。 1、过程概述

用于细胞内钙离子检测时，Fluo-3 AM的常用浓度为5μM。通常用含有5μM的Fluo-3 AM的适当溶液和细胞一起在37℃孵育30-60分钟进行荧光探针装载，随后适当洗涤，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-3 AM在细胞内完全转变成Fluo-3。然后在流式细胞仪上进行检测。

2、Fluo-3AM使用液的配置

100ug的Fluo-3AM，分子量是1219.9。按实际需要的摩尔浓度折算，无水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO储存液。如出现难溶现象，可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。

四、注意事项：

1、荧光染料有淬灭问题，应尽量避光保存；

2、实验时注意个人防护，戴手套、口罩；

五、应用举例

2、贮存液的配制（5000μM/L）

按照说明书，计算0.1mg 的摩尔数为0.089μM ，则需加DMSO18uL，微量加样器反复吹打混匀后分装，按说明书要求避光-20度冰冻保存。

（二）应用

每毫升细胞悬液中加入1 uL，则Fluo-3AM的使用终浓度为5μM/L

Hoechst 33258染色

固定液 50 ml

Hoechst 33258染色液 50 ml

抗荧光淬灭封片液 5 ml

说明书 1 份

保存条件：

4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。本试剂盒自订购之日起六个月内有效。

注意事项：

Oslash; 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。

Oslash; 需PBS或0.9%NaCl溶液。

Oslash; 需盖玻片与载玻片。

Oslash; 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。

Oslash; 在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。