外泌体裂解液RIPA加多少（ripa裂解液和细胞裂解液区别）

本文目录一览：

• 1、六孔板细胞裂解跑WB，每孔加多少RIPA合适？似乎没有固定的答案啊？
• 2、用12孔板的细胞提蛋白应该加多少裂解液合适
• 3、如何从动物组织中裂解得到蛋白
• 4、科研汪的日常 23 匀浆记
• 5、组织ripa必须按比例加吗
• 6、我想自己配制RIPA裂解液，请问去氧胆酸钠怎么配制？为什么我配的有白色沉淀呢？

六孔板细胞裂解跑WB，每孔加多少RIPA合适？似乎没有固定的答案啊？

每个厂家的说明书上都写着最适合他们产品的用量，一般是150到250，可以参考。

至于具体加多少还是要靠自己摸索的，每个实验室的习惯不同，因为这看你培养出来的细胞数量多少进行微调，最终是为了将孔内的细胞裂解掉而服务的。

学术嘛，哪来的固定答案

用12孔板的细胞提蛋白应该加多少裂解液合适

12孔板加100－200ul确实偏多，我为了减少上样体积、增加上样量，一般是先将细胞消化下来，然后一个50ml的培养瓶细胞沉淀加100－200ul的细胞裂解液，这样提出的蛋白一般是5-10ug/ul。如果使用直接裂解法的话，12孔板应该可以只用50ul，或者更少，你可以试一下，只要裂解液能覆盖所有细胞即可，再用枪头小心吹打以促进裂解液与细胞充分接触即可。但本人认为先消化收集细胞再裂解，对于需要高浓度蛋白相对比较好。

如何从动物组织中裂解得到蛋白

你好，提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液。一般是1：1进行配制。用的裂解液我们是RIPA。

将组织用液氮研磨碎了，然后按量加入裂解液，细胞量在10七次方左右是100微升。冰浴裂解20分钟（间断摇动）。然后4摄氏度离心12000rpm，15分钟。吸取上清定量。根据测定量的结果将各样品总蛋白量调匀，然后等体积加入loadingbuffer就可以电泳了。

你好，因为你最后取得是蛋白量，所以保证最终的总蛋白是相同的量就好了，组织只是提取的介质，我们定量的是最终的蛋白，而并非组织样品的蛋白含量。如果你想区分两种不同组织的蛋白含量是不同的，才会用到相同组织量。

在普通陶瓷研钵中就能进行，而且研钵可以不一次性使用。研钵处理的时候需要用锡纸包裹好，通过干热法灭菌，120℃烘箱。当然之前要洗干净。

科研汪的日常 23 匀浆记

入职以来遇到的尚未攻克的难题之一是磷酸化的抗体在组织样品里一直跑不出阳性信号。

最开始考虑可能是抗体比例问题，便由说明书建议的1：1000的稀释比例逐步增加到了1：50，始终只有杂带。联系厂家的技术人员，建议排除一下是不是是在组织中的表达太低所以看不到阳性信号，因此一方面根据厂家提供的protocol优化实验流程，另一方面液单独培养了一波细胞进行取样。事实证明，真的是组织样本的问题。

由于磷酸化的蛋白比较容易降解，因此首先考虑是否是在组织样本制作的过程中存在导致其降解的因素。将细胞样品的制备过程与之进行对比，可以优化的最可能的点是匀浆这一步。

组内讨论之后决定拿纯手工的玻璃研磨器同平时常用的电动匀浆仪进行一下比较。以排除电动匀浆仪匀浆过程中的产热问题对样品的影响。

根据师姐既往的经验，预先配制每个样品500ul RIPA混合物 (RIPA裂解液+1000X PMFS+100xPI+100X磷酸酶抑制剂）。先加入组织研磨后，加入200ul RIPA混合物，沿着玻璃柱加入，最后用200ul清洗一遍玻璃柱，避免产生过多气泡；另一方面用作对比的电动匀浆仪组每个样品准备200ul RIPA混合物。

开始操作的时候，本想着加了液体以后再研磨一下会比还没加RIPA混合液的效果更好，顺带还能清洗下管壁，可结果是，由于研磨管内空间很小，液体是进去了，到研磨过程中空气也跑了进去，导致整个管子里全都充满了气泡。直到此时才理解了师姐protocol里暗藏的玄机。

整个步骤听上去挺简单，而真正动手操作的时候，就变成脑子听懂了手却跟不上，还雄心勃勃想对步骤进行改良。避免产生过多气泡，真的应该避免。果然，不听老人言，吃亏在眼前。

科研欢乐的实验生活还在继续，要加油，争取早日攻关成功~

组织ripa必须按比例加吗

裂解30min后4度冷冻高速离心20min,弃沉淀,上清按比例加入5Xloading buffer沸水煮15min,即可上样,或-20度保存,用的时候沸水煮5min就行

我想自己配制RIPA裂解液，请问去氧胆酸钠怎么配制？为什么我配的有白色沉淀呢？

是否作为杀菌剂使用？

我们使用的是 浓度为1%的去氧胆酸钠溶液 需用冷却注射用水配制，倒入即可，不需搅拌，过段时间自动成为透明溶液1

只用之前配合葡萄糖醋酸铵 作为球菌杀菌剂使用